用PCR检测细胞培养中支原体污染

细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题.为了扩增6种支原体(精氨酸支原体,口腔支原体,人型支原体,猪鼻支原体,发酵支原体及莱氏支原体)核糖体RNA操纵子的16s和23s DNA间区,设计了三个通用PCR引物(F1,F2及R1).当以6种支原体DNA为模板时,引物F1和R1产生340到468bp的片段,引物F2和R1产生145到211bp的片段,当用Hela细胞或E.coli DNA作为模板,用引物F1和R1时,在电泳中未观察到特定区带.此法最小能检出8.5fg精氨酸支原体DNA,相当于13个精氨酸支原体.这说明,当这些支原体污染细胞培养时,能用PCR法检测出来.     

支原体新培养基的效果观察

既往常规使用的支原体培养基主要成份为盐酸消化猪胃胨,牛肉浸液,马血清及酵母浸液。近几年采用猪肺消化液代替猪胃胨和牛肉浸液,卵黄液代替马血清组成新培养基。用上述两种培养基对四种支原体进行多次定性和定量的生长效果对照观察。结果表明新培养基的培养效果与常规培养基一致,而且较常规培养基来源方便,价格便宜。用新培养基制备的抗原质量更为理想。