噬菌体phi29 DNA包装马达磷脂膜嵌合体在单分子检测及纳米医学领域的应用

生命系统包含了具有不同功能的纳米机器和高度有序的大分子结构。所有的双链线性DNA病毒使用由ATP驱动的纳米分子马达将其基因包装在蛋白质外壳内。噬菌体phi29 DNA包装马达的核心组成部分连接器已被成功嵌入到脂双层中,极为稳定且可用于离子和DNA转运的精确测量。它在包装DNA时具有单向通行的阀门机制,同时其关闭和打开可由人工控制。这对于详细研究分子马达的操作机制及未来医药应用中DNA的包装、测序、采样和投递都具有重要意义。     

Novobiocin、Coumermycin A、Oxolinic acid、Nalidixic acid、溴化乙锭和ATP类似物对细菌病毒φ29细胞外DNA包装的抑制作用

四种抗菌素Novobiocin、CoumermycinA、Oxolinicacid和Nalidixicacid以及化合物溴化乙锭(Ethidiumbromide)和ATP类似物γ—S—ATP能抑制噬菌体φ29DNA的细胞外包装。达到50％抑制作用的药物浓度(不包括ATP类似物)分别为每毫升5、90、167、380和1.3微克。当ATP类似物加入完全纯化的φ29胞外DNA包装系统时,DNA包装的中间产物积蓄,DNA包装流产,表明DNA装壳的整个过程均需ATP的参与。这一发现为抗病毒药物的研究提供另一条线索。本文并对φ29DNA包装的可能机制进行讨论。     

双链DNA细菌病毒DNA包装的机制

病毒是由蛋白质和核酸构成的,每种病毒只含有一种核酸—DNA或RNA。在病毒繁殖的过程中,蛋白质的合成和核酸的复制是分别由两套不同的机器来完成的。当蛋白质和核酸分别合成之后,两者如何结合以形成具有感染性的病毒粒子?这一问题早就引起病毒学家的兴趣而至今尚未完全得到解答。病毒核酸包装(packaging or encapsidation)就是指核酸与结构蛋白相互结合的过程。其机制的阐明将能为研究蛋白质、DNA和     

pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究

为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用.通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况.试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平.在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%.初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达.本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持.     

细菌病毒phi29DNA—装运泵六聚体RNA结构和功能的研究方法

在双链DNA病毒增殖和成熟的过程中 ,需要将相当长的子代DNA装入一个极为有限空间的新生病毒衣壳。整个核酸装壳过程是耗能的过程 ,必需依靠生物泵来将DNA推入壳中。在细菌病毒phi2 9的核酸装壳过程中 ,需要RNA分子作为此生物泵的重要构成组分。6个RNA分子构成一个六边形样螺帽 ,将DNA如螺栓般装入病毒衣壳。6个RNA的这种依次运动的轮流作用模型如同汽车发动机的 6个气缸依次起火的原理一样 ,只是能源来自ATP而不是汽油。综述了此RNA的结构 ,及其结构对其功能所起的重要作用 ,并着重阐述研究 pRNA结构的独特构思和方法     

疱疹病毒α-亚科部份成员gC等同膜糖蛋白的同源性及进化

马疱疹病毒Ⅰ型属疱疹病毒α—亚科。本文分析了其膜糖蛋白g13基因的碱基序列,并由此推导其相应的氨基酸序列。同时利用电子计算机程序将g13与α—亚科的其它成员如伪狂犬病毒、水痘带状疱疹病毒和单纯疱疹病毒的相应膜糖蛋白进行比较,揭示了g13与伪狂犬病毒的g3、水痘带状疱疹病毒的gV和单纯疱疹病毒的gC同源,称为gC等同膜糖蛋白。这组膜糖蛋白都含有前导序列、跨膜疏水区域和天冬氨酸相关的糖基连结区。同时,这四种糖蛋白羟基端那一半的氨基酸序列高度保留,说明这一端具有重要的生物学功能;而氨基端那一半,除前导序列外,几乎找不出相似性。亚科中各病毒的寄主不同,各种糖蛋白在基因中的相应位置也不尽相同。同时,氨基酸序列的相似性较强,而碱基序列的相似性较弱。这一切表明,此亚科的病毒属同一起源而又经高度分化。     

pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究

为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平。在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%。初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达。本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持。     

肝脏去唾液酸糖蛋白受体特异性RNA适配子的SELEX筛选与鉴定

目的获得能够特异性高亲和力结合肝脏特异性去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor,ASGPR）的RNA适配子,为开发诊断和治疗肝脏疾病的靶向性试剂和药物奠定基础。方法合成一个长度为115nt含有25个随机序列的单链DNA随机文库,通过体外转录构建出单链RNA适配子随机文库,以肝脏ASGPR大亚基为靶蛋白,采用SELEX（systematic evolution of ligands by exponential enrichment）技术筛选具有高亲和力的AsGPR特异性RNA适配子;通过膜结合测定实验、凝胶阻滞实验鉴定筛选适配子对靶蛋白的特异性和亲和力。结果经过12轮筛选获得了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子。结论成功地筛选出了具有离亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子库。