发根农杆菌转化怀地黄再生植株

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。用100μmol/L乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7%的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L 6/BA的1/2 MS培养基上,毛状根能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2 MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g,是鲜地黄梓醇含量的48.5%,是生地鲜重梓醇含量的18%。rolB基因PCR、Southem blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达。     

草木樨状黄芪抗甲硫氨酸变异系的离体筛选及鉴定

通过组织培养体系进行了草木樨状黄芪(Astragalus melilotoides Pall.)抗甲硫氨酸变异系的筛选。无菌苗幼茎切段诱导的愈伤组织经NaN3诱变后,经过筛选获得了抗14mmol/L甲硫氨酸的变异细胞系,并分化出大量植株。再生植株已经在大田中开花结实。经分析表明：抗性细胞系脱离选择压6个月后,放在含15mmol/L甲硫氨酸的培养基上培养25天后,其相对增长率是对照的10．2倍。抗性系再生植株游离甲硫氨酸是对照的2．12倍,并且天冬族氨基酸都有明显增加。SDS-PAGE及过氧化物酶同工酶分析表明：在蛋白质及同工酶酶谱上抗性系再生植株均出现与对照不同的差异。     

单粒干燥大豆种子基因组DNA提取的有效方法

大豆基因组DNA的提取是进行大豆分子生物学研究的基础.以大豆干燥的种子为材料,将SDS法和CTAB法结合在一起并进行了一定的改进,有效的提取了基因组DNA.通过电泳、紫外分光光度计检测和ISSR标记分析验证这种方法是提取大豆干种子基因组DNA的有效方法.     

3种发根农杆菌A4转化系毛根的细胞学观察及同工酶酶谱分析

利用根尖压片法对可再生型发根农杆菌A4转化系毛根和不可再生型转化系毛根进行了染色体计数,并利用聚丙稀酰胺凝胶电泳法对其进行过氧化物酶(POD)、细胞色素氧化酶(COD)、酯酶(EST)的同工酶酶谱分析。结果表明：(1)染色体丢失现象在转化的毛根根尖中是普遍存在的,不可再生转化系与可再生转化系相比,染色体丢失比例显著增多;(2)不可再生转化系的POD和COD同工酶酶谱变化较可再生转化系的变化大,且EST含量明显低于可再生转化系。     

骆驼蓬的组织培养及植株再生

以骆驼蓬(Peganum harmala L)无菌苗下胚轴切段为材料,在不同的培养基上进行愈伤组织的诱导,发现在MS基本培养基附加2．0mg/L 2,4—D、0．5mg／L 6—BA和3％蔗糖时,可100％的诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加2．0mg／L 6—BA、0．5mg／L NAA、500mg／L CH和3％蔗糖的MS培养基上诱导出丛生芽,进而发育成苗,苗的分化频率在30％左右。分化苗或其茎切断在附加0．2mg／L IBA、0．2mg/L NAA和3％蔗糖的l／2MS培养基上出现根的分化,分化频率在90％以上。再生植株经炼苗后移栽成活,成活率在80％以上。     

沙葱(Allium mongolicum Regel)离体培养再生可育植株

以沙葱（Allium mongolicum Regel)的叶基切段作外植体,成功地诱导出愈伤组织和再生植株。诱导愈僵组织的培养基为附加2mgL^-22,4-D和0.2mgL^-1KT的MS培养基。愈伤组织转移到附加2mgL^-16BA和0.4mgL^-1NAA的MS培养基后分化出大量的苗;分化苗在含有IBA1mgL^-1的1/2MS培养基上生根最佳。再生植株移栽成活率在95%以上。移栽到田间的植株第二年以后可正常开花结实。     

半日花的组织培养及植株再生(简报)

半日花(Helianthemum Songaricum Schrenk)是半日花科半日花属落叶小灌木,分布于新疆、甘肃和内蒙古等荒漠地区海拔1000米至1300米山地。为亚洲中部荒漠特有种和古地中海植物区系孑遗种,是生长了7000万年的远古植物。比具有“活化石”之称的水杉和银杏还要早几千万年。植物学家将它及与之同龄的四合木、沙冬青和革苞菊等十几种植物统称为“古老残遗濒危植物”。故而在研究亚洲中部荒漠,特别是研究我国荒漠植物区系的起源以及与地中海     

甘薯质体中的乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accD的克隆与序列分析

依据烟草质体全基因组序列设计引物,以甘薯质体基因组DNA为模板,PCR扩增包含质体accD基因完整编码区在内的一段序列（GenBank登录号为GQ395771）。序列分析表明：该片段全长为2209bp,包括1548bp的nccD基因编码序列,推测编码515个氨基酸的蛋白质,该蛋白序列具有异质型β-CT中保守的锌指结构和C末端5个基元。同时绘制了该DNA片段的限制性酶切图谱。相似性比较显示,甘薯accD基因与大豆、马铃薯、拟南芥、人参、莴苣、葡萄、海岛棉、甘蓝、辣椒、菠菜、番茄和烟草的accD基因核苷酸相似性为72％-87％,氨基酸相似性为58％-83％。     

用于药用蛋白生产的外源表达系统

种表达系统在重组蛋白生产上将长期共存.而通过遗传改造、基因组学、蛋白质组学等研究方法不断改进各种外源蛋白表达系统的性能,不断建立更加优越的外源蛋白表达系统则是大家共同努力的目标.     

毛头鬼伞中一条新28S rRNA的发现及其同源性分析

本研究从担子菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)菌丝中分离获得一条新的28S rRNA序列,序列长度为906bp(GenBank accession No.GU568178)。该序列是我们前期在从毛头鬼伞中克隆一种烟草花叶病毒(TMV)的抗性蛋白基因y3时意外获得的一条非目的条带。将此获得的序列通过NCBI的BLAST,以及与其同源序列进行Clustal w和MEGA聚类分析,证实该序列是28S rRNA,同时还发现毛头鬼伞的系统进化关系比较离散。此外,在这一新28S rRNA与TMV的抗性蛋白基因y3之间发现有两个同源区段有可能是PCR扩增y3基因时出现非目的条带的原因。在这两个同源区段中,其一区段与克隆y3基因时所用的PCR引物之一有较高的相似性,另一区段也是一般PCR引物的类似物。本研究中新28S rRNA序列的获得是PCR扩增中出现非目的条带的新例,该序列的发现及聚类分析的结果有助于真菌基因组学研究及真菌生物分子分类系统的建立。