抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价、高特异性的抗人胱抑素 C 鸡卵黄 IgY 抗体,并对其基本特性进行分析和鉴定.方法:以人胱抑素 C 为抗免疫产蛋的罗曼鸡,采用水稀释-盐析法提取及纯化 IgY 抗体,采用蛋白质定量、SDS-PAGE、West?ern 印迹和 ELISA 法对 IgY 抗体进行分析和鉴定.结果:免疫后14 d 即可从鸡冠血中检测出抗胱抑素 C 的特异性抗体,抗体效价在28 d 达最高峰(1∶32000),并可维持2个月以上;收集高效价时的免疫鸡蛋,制备鸡卵黄抗体 IgY;还性 SDS-PAGE 显示抗体 IgY 为相对分子质量分别为65×103和21×103的2条带,抗体纯度可达92%,得率为每个鸡蛋36.5 mg,抗体检出敏感度为15.63 ng/mL;Western 印迹证明该抗体具有高度特异性.结论:制备了抗胱抑素 C 的高效价、高特异性 IgY 抗体.     

用SDS-PAGE和Vorum银染法比较真菌菌丝体破壁效果

目的:研究不同处理方法对丝状真菌Pythium sp.GY1938菌丝体破壁效果的差异。方法:采用7种方法对真菌菌丝体进行破壁处理,将制备的胞内可溶蛋白质样品通过SDS-PAGE和Vorum法银染处理,比较不同破壁方法处理后蛋白质释放效果的优劣。结果:方法VI(石英砂、液氮、研磨)的破壁效果最好,蛋白质的分离效率和提取质量最高。结论:方法VI适合于丝状真菌Pythium sp.GY1938蛋白组学研究中目的蛋白的提取。