籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响

目的：建立廿烯醇化酶（EN01）腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法：采用EN01腺病毒过表达载体以梯度感染复数值（MOI）100、250、350、400pfu／cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后2,4h、48h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（EusA）研究EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果：最佳转染条件是,当MOI为350pfu／cell,转染48h后,转染率达100％;通过荧光定量PCR与Westernblot法,检测到EN01mRNA与蛋白均过表达（P〈0．01）;与培养液组和腺病毒空载体组相比较,EN01过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加（P〈0．01）。结论：EN01过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。