真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法

顺乌头酸酶（aconitase,Aco）是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸. 真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1（c-Aco）和定位在线粒体的顺乌头酸酶2（m-Aco）.检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变. 顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性. 该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱. 同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.     

矮壮素(CCC)和三碘苯甲酸(TIBA)在大豆栽培中的应用

在大豆生产中合理使用植物生长调节剂可增加产量。近几年，矮壮素（CCC）和三碘苯甲酸（TIBA）应用于大豆上增产效果较显著。一般增产幅度为州左右。大豆在营养生长时期的生长状况与产量关系密切。营养体生长健壮，可为多开花多结荚创造有利条件，为调节营养生长和生殖生长的矛盾奠定基础。为了使大豆达到苗全、苗匀、苗壮，前期生育不能过于繁茂徒长，否则会出现贪青晚熟倒伏，影响光合产物积累，甚至落花落荚。倘若大豆初花期生长过于繁茂，就可喷洒矮壮素和三碘苯甲酸，以抑制徒长，有利于促进矮化壮杆、早熟，防止倒伏。矮壮素能阻抑…     

半胱氨酸脱硫酶突变体H104Q,E156Q,D180G,Q183E和K206A通过改变对磷酸吡哆醛的结合影响酶活性

大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶（cysteine desulfurase,IscS）是一类依赖磷酸吡哆醛（pyridoxal phosphate,PLP）的同质二聚体的酶.IscS能催化游离底物L-半胱氨酸脱硫,生成L-丙氨酸和单质硫.在此催化过程中,可形成与酶结合的半胱氨酸过硫化物中间物,并出现了7种具有不同特征性吸收峰的中间反应物.为了研究PLP的结合及中间反应物的形成及累积,对IscS中与PLP结合相关,及IscS半胱氨酸活性口袋中特定氨基酸残基位点（His104,Glu156,Asp180,Gln183和Lys206）进行定点突变,结果发现：1）IscS突变体H104Q、D180G、Q183E、K206A对PLP的结合能力具有不同程度的减弱,酶的活性明显降低甚至消失,PLP与蛋白结合的特异吸收峰消失,或发生明显偏移并出现新的吸收峰,且这些新出现的吸收峰又与蛋白形成的各种中间反应物的吸收峰一致|2）IscS突变体E156Q的活性增高,PLP与蛋白结合的吸收峰明显增加.这些结果都表明,IscS氨基酸残基可通过影响PLP的结合及质子转移引起催化过程中不同中间反应物的形成及累积,同时提高或降低蛋白的活性.     

壳聚糖及其衍生物在生物医药中的应用与研究进展

随着科学、医疗技术的不断发展,自然界中很多有用的化学物质都被提炼出来,并广泛运用于生物、医疗、美容、化学等方面,壳聚糖就是其中的一种,壳聚糖具有天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性,这些特性使得其被各行各业广泛关注并应用。本文系统地介绍了壳聚糖极其衍生物发展史、性质、以及其生物医药中的具体应用。     

低表达线粒体蛋白ISCA2对线粒体功能影响的机制研究

该文探讨了ISCA2蛋白低表达对细胞内铁硫蛋白和能量代谢的影响。在HeLa细胞内将ISCA2基因敲低,通过免疫印迹、顺乌头酸酶胶内酶活性分析法分析线粒体内外铁硫蛋白水平和活性改变;用紫外–可见分光光度法检测细胞线粒体内氧化磷酸化复合体活性;用海马能量分析仪分析细胞内能量代谢的改变。结果表明,ISCA2蛋白低表达后,氧化磷酸化复合体中各铁硫蛋白亚基都出现不同程度的下调,且对于线粒体[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响显著,但对线粒体[2Fe-2S]型铁硫蛋白亚基以及胞质[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响较小。同时,ISCA2蛋白低表达后对线粒体复合体活性和线粒体能量代谢影响显著,细胞有氧呼吸降低,细胞外乳酸含量增加。这些结果表明,ISCA2蛋白低表达后抑制铁硫簇的组装,导致铁硫蛋白功能障碍,影响线粒体复合体活性和氧化磷酸化系统,使得细胞能量代谢紊乱。     

微生物比浊法测定妥布霉素地塞米松眼膏的效价

目的:分析微生物比浊法在测定妥布霉素地塞米松眼膏的效价。方法:分别使用三种方式测定妥布霉素地塞米松眼膏的含量,分别是微生物比浊法、管碟法以及高效相色谱法。结果:妥布霉素效价测定的线性区间在0.4至1.0U·mL-1之间,RDS为0.96%。结论:微生物比浊法的操作相对便捷,测量的结果也更为准确,能够广泛使用在产品的质量控制操作上。