泛素链的体外制备、磷酸化修饰与标记方法

目的 为了制备不同链种类、不同链长及磷酸化修饰的泛素样品。方法 本文主要以生物酶法为手段对以上样品的制备路线进行阐述。制备的主要方法分为两种,一是采用逐次添加的方式达到泛素链延长的目的,二是通过一次酶反应制备混合的多聚泛素链,然后对不同链长的泛素链进行纯化分离。结果 以上两种策略都能达到制备多聚泛素链的目的。进一步,通过对泛素进行磷酸化修饰,制备了磷酸化的泛素样品。通过K11和K48的泛素酶制备了K11/K48分支链泛素。结论 基于以上泛素链的制备路线,可以进一步对不同链接形式的不同亚基进行磷酸化修饰等翻译后修饰,也可以通过在特定亚基进行同位素标记及在特定位点引入小分子探针,进而进行NMR和FRET的测定。综上所述,本方法将为从事泛素信号通路和泛素生化研究的科学家提供借鉴和帮助。     

Mdm2/MdmX抑制剂

Mdm2(murine double minute 2,又称为Hdm2)和Mdm X(murine double minute X,又称为Hdm4)的异常过表达与近半数的癌症直接相关,设计靶向Mdm2/Mdm X-p53蛋白质相互作用位点抑制剂,解除Mdm2和Mdm X对p53的抑制作用有着重要的临床意义。尽管Mdm2和MdmX结构非常相似,但仅有Mdm2小分子抑制剂的筛选和设计研究较深入。对依据nutlin分子构效关系、结构生物学、组合化学多重优化等手段筛设计MdmX抑制剂的研究进展进行简述,并讨论天然产物库在筛选Mdm X/Mdm2抑制剂新型结构框架的应用前景。