烟草花叶病毒蚕豆株系基因组全序列 分析及结构特征*1)

根据已报道的TMV-U1株系核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR技术获得了覆盖整个烟草花叶病毒蚕豆株系（TMV-B）基因组的cDNA重组克隆.结合末端测序技术,完成了TMV-B全基因组序列测定.TMV-B全基因组共有6 395个核苷酸组成,包括4个开读框（ORF）,分别编码126 ku（含1 116个氨基酸）、183 ku（含1 616个氨基酸）、30 ku（含268个氨基酸）和17.5 ku蛋白（含159个氨基酸）.TMV-B与TMV-U1相比全基因组同源率达99.4%,两病毒基因组5′,3′非编码区和CP基因完全相同.TMV-B与TMV-U1之间在126 ku蛋白中有6个氨基酸差异,54 ku蛋白中有2个差异,30 ku蛋白中有3个差异.对导致TMV-B侵染蚕豆的可能致病机理进行了分析.     

烟草花叶病毒蚕豆株系基因组全序列分析及结构特征

根据已报道的TMV-U1株系核苷酸序列合成引物 ,利用RT-PCR技术获得了覆盖整个烟草花叶病毒蚕豆株系 (TMV-B)基因组的cDNA重组克隆 .结合末端测序技术 ,完成了TMV-B全基因组序列测定 .TMV-B全基因组共有 6 395个核苷酸组成 ,包括 4个开读框 (ORF) ,分别编码 1 2 6ku(含 1 1 1 6个氨基酸 )、1 83ku(含 1 6 1 6个氨基酸 )、30ku(含 2 6 8个氨基酸 )和 1 7.5ku蛋白 (含 1 5 9个氨基酸 ) .TMV-B与TMV-U1相比全基因组同源率达 99.4% ,两病毒基因组 5′ ,3′非编码区和CP基因完全相同 .TMV-B与TMV-U1之间在 1 2 6ku蛋白中有 6个氨基酸差异 ,5 4ku蛋白中有 2个差异 ,30ku蛋白中有 3个差异 .对导致TMV-B侵染蚕豆的可能致病机理进行了分析 .     

受番茄花叶病毒侵染后寄主的超微病变研究

电镜观察了番茄花叶病毒（ＴｏＭＶ）侵染不同寄主的细胞超微结构变化。在２５℃下ＴｏＭＶ侵染番茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌｌ）后,病毒粒子在叶片的表皮,薄壁细胞,维管束组织的细胞质中形成大块结晶体和类结晶体,液泡膜处产生小泡结构,有多泡体和髓鞘样结构构伸入液泡中,在２５℃下ＴｏＭＶ侵染珊西烟（ｉｃｏｔｉａｎａｔａｌａｃｕｍＬ．ｃｖ．Ｘａｎｔｈｉｎｎ）后,除存在病毒结晶体和类结     

Complete nucleotide sequence and genome organization of tobacco mosaic virus isolated from Viciafaba

Based on reported TMV-U1 sequence, primers were designed and fragments covering the entire genome of TMV broad bean strain (TMV-B) were obtained with RT-PCR. These fragments were cloned and sequenced and the 5' and 3' end sequences of genome were confirmed with RACE. The complete sequence of TMV-B comprises 6 395 nucleotides (nt) and four open reading frames, which correspond to 126 ku (1 116 amino acids), 183 ku (1 616 amino acids), 30 ku (268 amino acids) and 17.5 ku proteins (159 amino acids). The complete nucleotide sequence of TMV-B is 99.4% identical to that of TMV-U1. The two virus isolates share the same sequence of 5', 3' non-coding region and 17.5 K ORF, and 6, 1 and 3 amino acid changes are found in 126 K protein, 54 K protein and 30 K protein, respectively. The possible mechanism on the infection of TMV-B in Vicia faba is discussed.     

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3′端非编码区的克隆、序列分析及其表达

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系（ＴｏＭＶＬ）序列人工合成引物,经ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物（ＴｏＭＶＳ１）的外壳蛋白ＣＰ基因及３′端非编码区。序列测定结果表明,所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸,其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸,编码１５８个氨基酸,３′端非编码区含２０２个核苷酸,其核苷酸序列与ＴｏＭＶＬ株系具有９９．５％的同源率。将该基因片段克隆到ｐＧＥＭＥＸ１载体中,转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证明,该基因已在大肠杆菌中正确表达。这是我国首次报道ＴｏＭＶＣＰ基因序列。     

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3‘端非编码区的克隆,序列分析及其表达

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系序列人工合成引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物的外壳蛋白ＣＰ基因及３‘端非编码我。序列测量结果表明,所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸,其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸,编码１５８个氨基酸,３’端非编码区含２０２个核苷酸,其核苷酸序列与ＴｏＭＶ－Ｌ株系具有９９．５％的同源率。     

一种病毒侵染性全长cDNA克隆的快速构建方法

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了含烟草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）的他长基因组ｃＤＮＡ,并克隆ｐＴ７Ｂｌｕｅ载体中。以获得的全长ｃＤＮＡ及其ＰＣＲ产物为模板分别进行体外转录,接种试验发现转录产物均具有侵染活性。比较两种方法发现以ＰＣＲ产物为模板的体外转录物的侵染效率更高。