胶原蛋白的电子活性与矽肺纤维化Ⅱ正常大鼠与实验性矽肺大鼠肺Ⅰ型胶原稳定自由基的研究

由正常大鼠肺撮取的酸溶性Ⅰ型胶原出现一个明显的ESR信号(g=2.006),而由矽肺大鼠提取的酸溶性Ⅰ型胶原较少或缺乏该ESR信号,该信号不是顺磁过渡元素产生,而是稳定自由基的反映.肺胶原可能存在两种稳定的自由基,一种易受紫外线辐照的激发并且在电场极化下自旋耦合而减弱,另一种自由基则相对稳定,对紫外线辐照和电场极化不敏感.矽肺胶原缺乏活泼性较高的稳定自由基.     

肺腺癌中ALK基因重排的检测*

目的: 比较免疫组化(Ventana IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)对肺腺癌ALK基因的检出率。方法: 收集200例肺腺癌患者的临床及病理资料,光学显微镜下复阅其HE切片,标记肿瘤部位,评估蜡块保存情况,制成9张组织芯片,分别采用Ventana IHC和FISH检测ALK基因。结果: 200例病例中,通过FISH检测ALK阳性有9例,通过Ventana IHC检测ALK阳性有11例,其中有两例表现为Ventana IHC(+)、 FISH(-),1例外院做过基因检测,为ALK阴性,EGFR阳性,服用凯美钠,效果良好,另1例未做过基因检测,遂进一步予RT-PCR检验,结果为ALK阴性。最终ALK阳性为9例,Ventana IHC的敏感性和特异性分别是100%和98.95%。结论: Ventana IHC在检测ALK基因重排上表现出较高的敏感性和特异性,可用于FISH检测前的筛选,以避免不必要的FISH检测。     

用于哺乳动物细胞转染的高纯度质粒DNA的制备

目的：建立简便高效、成本低廉和安全无污染的高纯度质粒提取方法。方法：在乙酸铵方法的基础上加以改进,主要改进之处在于增加了用聚乙二醇纯化质粒的步骤,并对溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的成分和具体实验参数也做了合理的改进,以最少的步骤,充分去除了残存杂质,保证了质粒的超纯状态。结果：用本方法提取的质粒与用QIAGEN plasmid midi Kit提取的质粒在理化指标上没有差别,对哺乳动物胞具有同样的转染效率。结论：本方法可完全取代QIAGEN公司的试剂盒用于提取超纯质粒。     

黄体酮对3T3-L1脂肪前体细胞成脂分化后细胞中UCP2基因表达的影响

目的:观察体外培养条件下3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化成的成熟脂肪细胞中解偶联蛋白2(UCP2)mRNA表达水平及黄体酮对其表达的影响。方法:体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟后,经不同黄体酮浓度10μm/25μM/50μM/75μM/100μM刺激后,抽提总RNA,用RT-PCR检测UCP2 mRNA的表达。结果:黄体酮会促进成熟脂肪细胞中UCP2 mRNA的表达,(P<0.05)其中25μM浓度刺激下UCP2 mRNA表达量最高。结论:体外培养中,黄体酮对成熟脂肪细胞中UCP2 mRNA的表达与调控具有一定的影响。     

大戟苷抑制大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化

目的:观察泽漆主要活性成分大戟苷(euphornin)对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC)成骨分化的影响。方法:从大鼠股骨中分离培养rMSC,并诱导其成骨分化。用MTT法检测细胞增殖情况,通过茜素红染色,碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙含量测定分别定性、定量地判断其在成骨分化中的效果。实时定量PCR(Q-PCR)检测主要成骨标志因子骨桥蛋白(OPN)和一型胶原蛋白(COL-Ⅰ)及主要转录因子骨形成蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(Runx2)和Osterix(Osx)mRNA的表达。结果:大戟苷能剂量依赖性地抑制rMSC成骨分化,并一定程度地抑制其细胞增殖。COL-Ⅰ和OPN的表达在第4、8天分别有显著下降。BMP2、Runx2和Osx等关键转录因子的表达也被明显抑制。结论:大戟苷能抑制rMSC成骨分化,其作用主要是通过抑制BMP通路相关因子的表达而实现的。     

人致肺纤维化相关因子的克隆和生物信息学分析

几丁质酶是自然界广泛存在的一类降解几丁质的水解酶类,但是直至近些年才在哺乳动物体内发现存在有几丁质酶样蛋白.早年曾于矽肺大鼠中纯化出矽诱导的支气管肺泡灌洗蛋白iSBLP58,体外具有促进人胚肺成纤维细胞2BS增殖的作用,N端测序显示与哺乳动物几丁质酶蛋白家族成员具有高度同源性.生物信息学分析表明,来源于人的结肠、肾和胃的几个表达序列标签(EST)克隆和大鼠的这一蛋白质序列匹配.随后成功地从人肾RNA样品中克隆到一组cDNA,其序列及相应的氨基酸序列彼此高度相似,并与GenBank中的几个人几丁质酶蛋白高度相似.和人基因组序列比较,揭示这些分子可能来自于同一基因,为可变剪切的产物.     

大白菜和黄瓜原生质体电击基因转移的研究

本文以钙黄素、FITC-IgG 和溴乙锭-质粒 DNA 为荧光标记物,研究了电脉冲引起大白菜和黄瓜原生质体质膜通透性的改变及其动力学过程以及脉冲电学参数(脉冲幅值、个数、宽度)对原生质体成活率和外源物质导入率的影响。通过电击法成功地将外源 CAT(氯霉素乙酰转移酶)基因导入黄瓜原生质体并实现瞬间表达。45℃热激预处理原生质体有效地促进了CAT 基因的电击转移。     

胶原蛋白的电子活性与矽肺纤维化——Ⅰ正常大鼠与实验性矽肺大鼠肺Ⅰ型胶原的驻极体特性

本文对正常大鼠与实验性矽肺大鼠肺Ⅰ型胶原的驻极体特性进行比较研究.大鼠肺Ⅰ型胶原未经电场极化即可产生空间电荷性质的热刺激去极化电流(TSDC),表明具有天然驻极体特性.电场极化的TSDC实验说明肺胶原具有很显著的极化特性.矽肺肺胶原TSDC各峰峰位温度高于正常肺胶原,分子运动受到较大限制,紫外照射后TSDC强度的增加比较小.矽肺胶原固有极化潜力明显的弱于正常肺胶原,取极向活化能高于正常肺胶原.     

快捷提取能经受过夜酶切的质粒DNA

利用醋酸铵进行小量质粒提取,该方法不但快捷、经济和环保,所提质粒纯度能经受过夜酶切。     

黄体酮对3T3-L1脂肪前体细胞成脂分化后细胞中UCP2基因表达的影响

目的：观察体外培养条件下3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化成的成熟脂肪细胞中解偶联蛋白2（UCP2）mRNA表达水平及黄体酮对其表达的影响。方法：体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3．L1脂肪细胞分化成熟后,经不同黄体酮浓度10μm／25μM／50μM／75μM/100μM刺激后,抽提总RNA,用RT—PCR检测UCP2mRNA的表达。结果：黄体酮会促进成熟脂肪细胞中UCP2mRNA的表达,（P〈0．05）其中25μM浓度刺激下UCP2mRNA表达量最高。结论：体外培养中,黄体酮对成熟脂肪细胞中UCP2mRNA的表达与调控具有一定的影响。