双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。     

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

Calcium distribution and mobilization during mechanical stimulation in outer hair cells of the guinea pig were monitored using laser scanning confocal microscopy and co-loaded fluo-3 and fura-red fluorescent probes. Spatial calcium gradients were revealed among various subcellular areas. The ratios of the fluorescence intensity of fluo-3 and fura-red were 1.71 +/- 0.85, 1.61 +/- 0.75, 1.47 +/- 0.65 and 1.39 +/- 0.66 for the cytoplasm, the cytoplasmic membrane, the cuticular plate and the nucleus respectively, indicating that free calcium ion concentrations are the highest in the cytoplasm and the lowest in the nucleus. While the calcium concentration remained relatively constant under resting conditions, it increased during mechanical stimulation. The results show that confocal ratio imaging of fluo-3 and fura-red enables us to determine more accurately the subcellular calcium distribution and that the calcium ions make a contribution to the mechanic-electrical transduction in hair cells.     

听毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系

应用激光扫描共聚焦显微镜和ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ双重荧光标记法,研究豚鼠耳蜗分离外毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系。外毛细胞（ｏｕｔｅｒｈａｉｒｃｅｌ,ＯＨＣ）受药物或机械刺激后,其钙信号起源于一侧质膜,可形成钙波传向全细胞,对其中１个ＯＨＣ测得传播速度为０．０２５－０．０４７μｍ／ｓ。钙信号转导过程中各亚细胞区域游离钙浓度增加幅度不同。胞内游离钙增高时伴有细胞长度变化,缩短者占６／１０,伸长者占４／１０。对照组（不予刺激且胞内游离钙无变化者）３个外毛细胞中,缩短者２个,长度无变化者１个。实验表明,听毛细胞受刺激后可产生钙波,钙信号具有不均匀性,外毛细胞的钙依赖慢运动表现为细胞伸长,细胞缩短则在胞内游离钙浓度升高或保持于静态基准浓度时均可发生。     

听毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系

应用激光扫描共聚焦显微镜和ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ双重荧光标记法,研究豚鼠耳蜗分离外毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系。外毛细胞受药物或机械刺激后,其钙信号起源于一侧质膜,可形成钙波传向全细胞,对其中１个ＯＨＣ测得传播速度为０．０２５－０．４７μｍ／ｓ。     

豚鼠耳蜗内毛细胞、外毛细胞及外指细胞钙成像

用ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ荧光比值作细胞内游离钙指标,用激光扫描共聚焦显微镜测定豚鼠耳蜗分离的内、外毛细胞及外指细胞的游离钙,并利用钙成像技术进行细胞形态计量。单个外毛细胞呈试管状。内毛细胞呈烧瓶状,有明显的颈部。外指细胞分为体部及指状突部。毛细胞的胞内游离钙浓度明显高于外指细胞。毛细胞的胞质、胞核及表皮板的游离钙浓度不同。外指细胞的细胞体与指状突的游离钙浓度也不同。本研究认为,有无颈部为区别分离的内、外毛细胞的重要标准,外指细胞可凭借其特异的指状突结构以资识别。内耳毛细胞及外指细胞胞内游离钙分布的不均一性可能与各部位生理功能不同有关。