以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

以香豆苹果素(coumarin)处理人染色体

1)用人子宮颈非赘生性及赘生性组织,也可用人口部和喉部其他赘生性组织,于活体检查后取下,立即固定于香豆苹果素(coumarin)饱和水溶液内,并立即在此液内剪为小碎块,每块约1.5毫米,在此液内浸5—10分钟。2)取出组织块,径入醋酸-卡红液中约1小时。3)取一小块置于载片上,吸去剩余染液,复以盖片并施加适度的压力使组织于载片及盖片间均匀地向     

以银及亚铁氰化物染色脑内显微电极处的组织学定位法

1)以显微电极记录神经冲动后,其显微电极连于阳极,以直流电100μa通过5秒钟,通过后,电板置原位不动,但其游离端(free end)剪断,仅留数个毫米电极线突出脑组织外。2)实验完后(可以用数个电极在不同部位作数次记录),将动物杀死,以4%亚铁氰化钾(pot.ferrocyani-de)及4%醋酸等量混合液50—75毫升注射内颈动脉,半小时后将脑取出,并将带有电极的脑组织块切下。     

新生大鼠辣椒素处理后脊髓内阿片受体的变化

本实验用受体放射自显影方法,研究了新生大鼠辣椒素皮下注射,成年后脊髓内３Ｈ－埃托菲（３Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ）结合位点数的变化。发现新生鼠辣椒素处理可以引起脊髓后角浅层及中央管周围’Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ结合位点明显减,其中Ⅰ、Ⅱ层自显影银粒数减少３６％左右。Ⅲ层减少２０％,中央管周围减少１１％。而前角及背外测束３Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ结合位点数无显著性差异。结果表明脊髓内初级感觉传入细纤维上有阿片受体分布。本研究为探明阿片类物质在脊髓水平的痛觉调控机制提供一定的形态学依据。     

应用硝酸铅显示内纲器

著者推荐了以硝酸铅代替 Cajal 氏硝酸铀的改良法,其步骤如下:(1)在下液内固定10小时。硝酸铅1克     

神经组织的氨基-银液染色

1) 神经组织以95%乙醇或10%甲醛(普通甲醛,甲醛盐液,中性甲酫)固定;石蜡切片。 2) 取氨基银液150—200毫升于染色皿内。 配法:0.035M的甘氨酸(glycine)或dl-蛋氨酸(dl-methionine)或dl-α-氨基-正-酪酸(dl-α-amino-n-butyricacid)或dl-组氨酸(dl-histidine)(硷性基游离)或dl-α-丙氨酸(dl-α-alaniae)的溶液与0.02M硝酸银溶液等量混合,     

焦性磷酸酶的组织化学显示法

甲) 硷性焦性磷酸酶(alkaline pyrophosphase)的显示法: 1) 新鲜组织片固定于冷的5%中性福尔马林液中(此液含有0.9%氯化钠)1小时。 2) 以0.9%氯化钠洗10—20分钟。 3) 冰冻切片(20—35微米),切片径入0.9%氯化钠中或酶作用基液中(Substrate solution)。 4) 切片入酶作用基液内,在37℃下作用3小时,基液之     

大鼠脊髓胶状质含亮啡肽终末与辣椒素敏感的C纤维终末的超微联系

本文应用免疫电镜术观察到,在大鼠脊髓胶状质内,亮啡肽(LEK)阳性的轴突终末与某些未标记神经元的树突、或树突棘、或胞体形成突触。其中一些轴(LEK)树(未标记)突触为对称性的。因此。在胶状质内,LEK神经元可以突触后抑制方式影响其它神经元的活动。LEK终末之间的对称性轴轴突触提示LEK终末可能具有自身调节作用。我们也发现少量的LEK终末与由硬脊膜外注射辣椒泰所致的一级传入C纤维变性(DEG)终末之间也存在直接和间接联系。这些联系包括以下几种:(1)轴(DEG)→树(LEK)突触;(2)轴(LEK)→轴(DEG)突触样接触;(3)轴(DEG)→树(未标记)←轴(LEK)三联体。这些联系分别提示:(1)一级传入C纤维可直接兴奋胶状质内含LEK的中间神经元,这可能是LEK对痛信息传递进行负反馈调节的机制之一;(2)LEK通过轴轴突触对一级传入C纤维的活动进行突触前抑制的可能性不能排除;(3)LEK可通过对上述三联体中的未标记树突进行抑制来间接调节一级传入C纤维的传入信息。此外,由未标记轴突终末与变性终末所形成的轴轴突触的存在提示,胶状质内非亮啡肽神经元也可通过轴轴突触以突触前抑制影响一级传入C纤维的功能。     

硬脊膜外腔注射辣椒素对大鼠一级传入C纤维的影响——组织化学与电镜观察

本文应用组织化学与电镜方法,观察了硬脊膜外腔注射辣椒素(CAP)对成年大鼠一级传入C纤维的影响。经CAP处理后第7天,大鼠脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层内P物质(SP)免疫反应性明显减弱,抗氟化钠酸性磷酸酶(FRAP)活性消失或明显减弱,但亮氨酸脑啡肽(LEK)、神经降压素(NT)及5-羟色胺(5-HT)免疫反应性无明显变化。电镜观察发现,CAP处理后脊神经后根内部分无髓神经纤维被破坏,但有髓神经纤维无变化。在给药后48小时的脊髓胶状质(SG)内即可出现变性(DEG)终末,在第5、7、和10天,DEG终末增多,DEG程度加重。部分DEG终末属于Ⅰ型突触球的中央终末,但Ⅱ型突触球的中央终末无DEG征象。以上结果表明,成年大鼠硬脊膜外腔注射CAP亦可有效而特异地损毁一级传入C纤维。此动物模型的建立为选择性地研究C纤维与SG内其它结构之间的超微联系奠定了基础,并在进一步研究C纤维的功能方面具有一定的实用价值。     

大鼠脊神经节内交感神经支配的荧光组织化学与HRP示踪观察

本研究应用乙醛酸诱发儿茶酚胺（ＣＡ）荧光技术观察大鼠肾上腺素（ＮＡ）能神经在脊神经节内的分布;并应用ＨＲＰ顺、逆行追踪技术对脊神经节内ＮＡ能神经纤维的起源及其与脊神经节神经元的关系进行了探讨。荧光组织化学观察发现、有些神经节神经元胞体周围分布有带膨体的ＮＡ能神经末梢;有的紧密围绕脊神经节细胞——卫星细胞复合体。颈上交感神经节内注射霍乱毒素Ｂ亚单位结合ＨＲＰ（ＣＢ┐ＨＲＰ）,在同侧Ｃ３～６节段脊神经节内可见标记的点状纤维末梢紧邻于节细胞旁。Ｔ１１～Ｌ２节段脊神经节内注射ＨＲＰ后,在同侧椎旁交感链（Ｔ９～Ｌ１）内可见标记的交感节后神经元胞体。上述实验结果表明,交感节后神经元发出节后纤维可直接到达脊神经节内,与节细胞发生接触。本研究提示、交感神经在脊神经节水平可能参与躯体初级传入信息的调制