三种蜘蛛粗毒对NG108—15细胞电压门控钠通道的抑制作用

利用小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞的杂交细胞NG108-15,通过全细胞记录(whole-cellrecording)模式的膜片钳技术,检验了虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena)、海南捕鸟蛛(Selenocosmia hainana)和广西大疣蛛(Macrothele guangxiasp)的粗毒对NG108-15细胞膜上电压门控TTX敏感型钠电流和延迟整流钾电流的作用.结果表明,三种蜘蛛粗毒对外向延迟整流钾电流没有明显作用,但对TTX敏感型的快钠电流表现出较强的抑制效应.抑制效应呈量效关系.三种粗毒抑制钠电流的EC     

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ突变体的固相合成和生理活性分析

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ(HNTX-Ⅳ)是从我国海南捕鸟蛛粗毒中分离出的一种TTX-敏感型的钠离子通道阻断剂,由35个氨基酸残基组成,含3对二硫键.为了研究HNTX-Ⅳ结构与功能的关系,用芴甲氧羰基(Fomc)固相多肽合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代HNTX-Ⅳ第12位丝氨酸(Ser12)的突变体S12A-HNTX-Ⅳ和替代第29位精氨酸(Arg29)的突变体R29A-HNTX-Ⅳ.合成的突变体经谷胱甘肽法氧化复性和纯化后,分别用MALDI-TOF质谱进行分子量鉴定,用一维核磁共振波谱法分析空间结构的变化,膜片钳电生理方法分析生物学活性.结果表明,Ser12和Arg29被Ala突变后没有明显影响分子的空间结构,S12A-HNTX-Ⅳ的生物学活性与天然HNTX-Ⅳ的相近,提示Ser12与HNTX-Ⅳ的生物学活性无关或关系不大;而R29A-HNTX-Ⅳ的生物学活性下降了155倍,说明Arg29是与HNTX-Ⅳ生物学活性相关的关键残基之一.推测R29A-HNTX-Ⅳ活性的降低是由于Ala替代Arg后改变了HNTX-Ⅳ与受体作用的位点,而不是由于毒素分子整体空间结构变化所致.     

海南捕鸟蛛毒素—Ⅳ对大鼠背根神经节细胞钠通道的抑制影响

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ（HNTX-Ⅳ）是从中国捕鸟蛛Seleconosmia hainana粗毒中分离得到的一种肽类神经毒素,在成年大鼠背根神经节（DRG）细胞上观察了该毒素对电压门控钠通道的影响。在全细胞膜片钳条件下,HNTX-Ⅳ能明显抑制哺乳动物神经性河豚毒敏感型（TTX-S）钠电流,但不影响河豚毒不敏感型（TTX-R）钠电流,HNTX-Ⅳ对DRG细胞TTX-S钠电流的抑制作用具有浓度依从性。其有效半抑制浓度（IC50）为44.6nmol/L。该毒素不影响DRG钠电流的激活与失活时间特征,但能导致钠通道的半数稳态失活电压向超极化方向漂移约10.1mV。结果表明HNTX-Ⅳ是一种新型的蜘蛛毒素,其影响电压门控钠通道的机制可能有别于那些结合于通道位点3来延缓钠电流失活时间特征的蜘蛛毒素如δ-澳洲漏斗网蛛毒素,μ-美洲漏斗网蛛毒素I-Ⅵ等。     

海南捕鸟蛛毒素-Ⅴ分离纯化及其抑制河豚毒敏感型钠通道活性研究

经阳离子交换和反相HPLC柱层析从海南捕鸟蛛（Seleconosmia hainana）粗毒中分离到1种新的神经毒素,命记为海南捕鸟蛛毒素－Ⅴ（Hainantoxin-Ⅴ,HNTX-Ⅴ）,MALDI－TOF质谱鉴定分子量为3969.5Da。在全细胞记录膜片钳模式下,HNTX－Ⅴ对成年大鼠背根神经节（DRG）细胞河豚毒敏感型（TTX－S）钠电流有抑制作用,但对河豚鼠不敏感型（TTX－R）钠电流无明显影响。HNTX－Ⅴ对TTX－S钠电流的抑制作用具有浓度依从性,其有效半抑制浓度（IC50）为46.8nmol/L。HNTX－Ⅴ不影响TTX－S钠电流的激活相和失活相,对钠通道的激活阈值和最大激活电压也无明显改变,表明HNTX－Ⅴ影响钠通道的作用机制明显有别于δ－ACTXs等蜘蛛毒素,推测HNTX－Ⅴ很可能类似于河豚毒、Saxitoxin和μ－conotoxins,同样作用于钠通道的位点S1。     

钠通道及其相关疾病综合征

钠通道是分布于可兴奋性细胞膜上的一种重要的阳离子通道,其开放控制着动作电位的去极化相,并积极参与了细胞的兴奋、收缩、分泌和突触传递等高度有序的特异性功能。最近研究表明许多困扰人类的家族性遗传病就是因为钠通道发生了基因突变而引起的。简要地综述了钠通道的结构及其目前已发现的相关疾病综合征。并描述了从动物毒素中获取治疗药物的应用前景。     

海南捕鸟蛛毒素-IV突变体的固相合成和生理活性分析

海南捕鸟蛛毒素_IV(HNTX-IV)是从我国海南捕鸟蛛粗毒中分离出的一种TTX-敏感型的钠离子通道阻断剂 ,由 35个氨基酸残基组成 ,含 3对二硫键。为了研究HNTX-IV结构与功能的关系 ,用芴甲氧羰基 (Fomc)固相多肽合成方法合成了用丙氨酸 (Ala)替代HNTX-IV第 12位丝氨酸 (Ser12 )的突变体S12A_HNTX_IV和替代第 29位精氨酸 (Arg29)的突变体R29A-HNTX-IV。合成的突变体经谷胱甘肽法氧化复性和纯化后 ,分别用MALDI-TOF质谱进行分子量鉴定 ,用一维核磁共振波谱法分析空间结构的变化 ,膜片钳电生理方法分析生物学活性。结果表明 ,Ser12和Arg29被Ala突变后没有明显影响分子的空间结构 ,S12A-HNTX-IV的生物学活性与天然HNTX-IV的相近 ,提示Ser12与HNTX-IV的生物学活性无关或关系不大 ;而R29A-HNTX-IV的生物学活性下降了155倍 ,说明Arg29是与HNTX-IV生物学活性相关的关键残基之一。推测R29A-HNTX-IV活性的降低是由于Ala替代Arg后改变了HNTX-IV与受体作用的位点,而不是由于毒素分子整体空间结构变化所致。     

海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ，一种新型的抑制昆虫电压门控钠通道失活的狼蛛神经毒素

通过阳离子交换和反相HPLC柱层析从海南捕鸟蛛（Ornithoconus hainana）粗毒中分离到一种新型的神经毒素,海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ(HNTX-Ⅵ), 由34个氨基酸残基组成,含有6个保守的半胱氨酸残基. 运用全细胞膜片钳技术,研究了HNTX-Ⅵ对电压门控钠通道的影响.先前从海南捕鸟蛛粗毒中分离到的几种毒素,具有抑制哺乳动物钠通道激活的特性.本文研究结果表明,HNTX-Ⅵ能以类似于δ-atractoxins作用方式延缓蜚蠊背侧不成对中间(dorsal unpaired median,DUM）神经细胞的钠通道的失活,且导致钠通道稳态失活变得不完全,在预钳制电压大于-55 mV时形成不完全失活结构. HNTX-Ⅵ的这种新的功能不仅为探索钠通道的门控机制提供了有用的工具,也为开发新的安全的杀虫剂提供理论基础.     

海南捕鸟蛛毒素-IV对大鼠背根神经节细胞钠通道的抑制影响(英文)

海南捕鸟蛛毒素 IV(HNTX IV)是从中国捕鸟蛛Seleconosmiahainana粗毒中分离得到的一种肽类神经毒素 ,在成年大鼠背根神经节 (DRG)细胞上观察了该毒素对电压门控钠通道的影响。在全细胞膜片钳条件下 ,HNTX IV能明显抑制哺乳动物神经性河豚毒敏感型 (TTX S)钠电流 ,但不影响河豚毒不敏感型 (TTX R)钠电流。HNTX IV对DRG细胞TTX S钠电流的抑制作用具有浓度依从性 ,其有效半抑制浓度 (IC50 )为 44 .6nmol/L。该毒素不影响DRG钠电流的激活与失活时间特征 ,但能导致钠通道的半数稳态失活电压向超极化方向漂移约 10 .1mV。结果表明HNTX IV是一种新型的蜘蛛毒素 ,其影响电压门控钠通道的机制可能有别于那些结合于通道位点 3来延缓钠电流失活时间特征的蜘蛛毒素如δ 澳洲漏斗网蛛毒素、μ 美洲漏斗网蛛毒素I VI等。