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1.
建立并优化了沼泽型水牛睾丸曲精细管蛋白质分离的双向电泳体系,为后续水牛睾丸曲精细管蛋白质表达谱的鉴定和研究奠定基础。比较不同IPG胶条(线性与非线性)、胶条pH范围和蛋白质上样量这三个参数对双向电泳结果的影响。结果显示,采用上样量350μg的曲精细管总蛋白、24 cm且pH值4~7的线性IPG胶条能够更好地分离水牛睾丸曲精细管蛋白质,获得质量较好且分辨率较高的双向电泳图谱,得到大约486个蛋白点。双向凝胶电泳技术能够对水牛睾丸曲精细管蛋白质进行有效分离,并通过对双向电泳体系的优化可获得蛋白质点清晰且分辨率更高的双向电泳图谱。  相似文献   
2.
水牛睾丸支持细胞(Sertoli cells)是环绕在精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)周围的一类体细胞,为SSCs增殖提供物理支持及稳定的环境,同时参与血睾屏障形成.支持细胞可分泌FGF2,从而提高SSCs存活和增殖.至今为止,水牛SSCs培养体系仍然面临许多挑战,推测内源性的FGF2可提高SSCs在体外培养时的自我更新和增殖能力.为此,本研究探索了水牛支持细胞的分离纯化方法,对比了幼年和成年水牛支持细胞FGF2的表达差异,并构建了支持细胞FGF2过表达细胞系.结果表明,幼年水牛支持细胞作为饲养层更有利于维持SSCs的增殖.实时荧光定量PCR显示FGF2在过表达细胞系中的水平显著高于幼年水牛支持细胞对照组的水平.与幼年水牛支持细胞作为饲养层共培养的SSCs相比,FGF2过表达支持细胞系作为饲养层共培养SSCs显著提高PLZF(P<0.05)、OCT4(P<0.05)和GFRα1(P<0.05)的表达水平,并且明显改善了SSCs的体外培养性能.本研究为优化水牛SSCs体外培养系统提供理论和实践基础.  相似文献   
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