下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。 方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50 μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50 μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50 μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-α mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。 结果LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 11.091,11.585,P均< 0.001）;LPS组与LPS+siTLR4-3组TLR4 mRNA（1.39±0.09,3.28±0.15）和蛋白表达（0.31±0.02,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 20.857,12.650,P均?< 0.001）且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA（11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F?= 98.803,P均< 0.01）、TNF-α mRNA（15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F?= 278.064,P均< 0.01）、Cleaved Caspase-3蛋白（0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F?= 154.851,P均< 0.01）、Bax蛋白（0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F?= 71.310,P均< 0.01）、NF-κBp65蛋白（0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F?= 56.571,P?均?< 0.01）的表达水平和细胞凋亡率[（21.36±2.85）﹪,（20.94±3.22）﹪,（13.08±1.16）?﹪,（7.25±1.28）﹪,F?= 25.685,P均< 0.01]均明显升高,而细胞活力（0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F?= 80.811,P均< 0.01）和Bcl-2蛋白（0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F?= 76.762,P均< 0.01）、IκBα蛋白（0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F?= 53.635,P均< 0.01）的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义（t = 8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均< 0.01）,而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（t = 6.005,4.899,3.674,P < 0.05）,而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。     

重庆市野生黄精中17种氨基酸的分析与评价

目的：建立黄精中多种氨基酸的全自动测定方法，对重庆市野生黄精中氨基酸类成分进行分析与评价，为野生黄精的深度开发提供理论基础。方法：样品中加入6 mol/L盐酸溶液，135℃水解4 h，经过酸式缓冲溶液（pH 3.45）和碱式缓冲溶液（pH 10.85）梯度洗脱，氨基酸专用柱（4.6 mm×150 mm）分离，茚三酮溶液（20 g/L）衍生，通过可见光分光光度检测器在440 nm和570 nm处，实现了17种氨基酸的有效分离。结果：17种氨基酸在各自质量浓度范围内线性关系良好（r≥0.998 5），平均回收率为83.28%～91.08%。野生黄精中共检出17种氨基酸，谷氨酸（2.001±1.164 g/100g）和组氨酸（1.070±0.448 g/100g）含量占比最高；野生黄精中含7种必需氨基酸，占总氨基酸比例为29.6%±5.1%；多数氨基酸种类之间呈极显著正相关关系（P <0.01），最高相关系数可达0.980。结论：利用全自动氨基酸测定仪法测定黄精中氨基酸类成分，分离效果好，精密度、重复性良好，结果准确可靠；黄精中含有丰富的氨基酸资源，本研究可为黄精的资源开发利用提供基础...     

重庆市野生黄精中重金属含量分析与评价

目的：建立电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定不同产地黄精中砷、铅、铬、镉、汞含量的方法，进行含量分析，为黄精的医用和食疗安全提供理论基础。方法：采用ICP-MS法对52份野生黄精样品中5种重金属进行检测，内标法定量，并进行数据分析。结果：野生黄精中5种重金属的方法检出限为0.002～0.020 mg/kg，回收率为95.5%～104.4%，精密度为2.8%～4.6%；野生黄精根茎中含量高低依次为铬、铅、镉、砷和汞，各元素间呈正相关；巫山的铬和砷显著高于其他地区，奉节的铅最高，石柱的镉显著高于其他地区；黄精不同部位的重金属含量高低：根须>根茎>叶子>种子，其中根须的铬含量高达4.406±1.021 mg/kg。结论：野生黄精的重金属含量存在一定的地域性差异；不同部位的含量也有差异：地下部位（根须、根茎）含量大于地上部位（叶子、种子）。本研究可为黄精的外源性污染提供数据支撑。