大肠杆菌合成的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)转化为e抗原(HBeAg)的探索

本文以带有HBcAg基因重组质粒的大肠杆菌转化株Ecoli MM206所合成的HBcAg进行HBcAg转化为HBeAg的探索研究。菌经超声破碎获得的菌裂解液对生理盐水透析两天后,酶联检测发现抗原性部分转化为HBeAg。将菌裂解液或HBcAg精制品用2-巯基乙醇处理,可使抗原性发生进一步转化。但是分子筛层析证明抗原蛋白分子大小没有明显变化。这种制品有可能作为诊断试剂用以检测抗-HBe,而且实验结果表明HBeAg是由HBeAg衍变来的。为要提高HBeAg的稳定性,以碘乙酰胺处理,使还原的抗原蛋白通过羧甲基化反应封闭游离的巯基。经上述处理的HBeAg通过分子筛层析可与大部分细菌杂蛋白分开,制品只有HBeAg活性而测不到HBeAg活性,因而提高了抗原蛋白的稳定性与纯度。     

大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究及其应用

37℃用1％β-巯基乙醇处理大肠杆菌HBcAg2小时,可使其全部转化成HBeAg。以常规ELISA方法不能检出HBcAg活性。该制品能被抗-HBe阳性血清特异中和。4℃以液体形式存放稳定,-20℃经过冻融活性下降。HBcAg转化成HBeAg后聚丙烯酰胺凝胶电泳行为有所改变。分别用转化的大肠杆菌HBeAg和血浆HBeAg作为酶联反应的诊断试剂,检测35份HBsAg阳性乙肝病人血清标本的抗-HBe,符合率为91.4％。同用Abbott-HBe(RIA)试剂盒测定的17份HBsAg阳性血清标本的试验结果比较,符合率为100％。说明转化的大肠杆菌HBeAg可代替血浆HBeAg作为检测抗-HBe的诊断试剂应用。     

大肠杆菌合成的乙型肝炎病毒核心抗原的研究Ⅱ．HBcAg的提纯

本文报道HBcAg基因工程菌MM206株的粗提物通过DEAE柱后,基因表达产物HBcAg与核酸及大部分细菌蛋白分开后,再经凝胶过滤和亲和层析作进一步提纯。经DEAE层析和亲和层析获得的纯制品聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示一主带和两小带。从sepharose 4B柱和亲和层析柱洗出的HBcAg,ELIsA检测证明其比活性分别比粗制品高40倍和100倍,以纯制的HBcAg注射家兔,在6只接受免疫的动物中均产生有抗一HBc,能与从人肝提取的HBcAg产生特异的免疫反应,这表明大肠杆菌合成的HBcAg在动物体内具有生物学活性。     

GM-CSF PCR产物的克隆:一种快速克隆PCR产物方法的建立

由于Taq DNA聚合酶对腺苷A的优先聚合,PCR产物两单链3′端带有一非模板依赖的碱基,所加多余碱基几乎总是A,因此用克隆平端DNA片段的方法克隆这种PCR产物,很难得到阳性重组子。解决上述问题的方法有3种,一是利用T_4 DNA聚合酶的3′外切酶活性,将PCR产物的多余碱基切掉;二是利用3′端带有dT的T-载体进行克隆;另外还可以用Pfu等DNA聚合酶扩增出不带多余碱基的PCR产物,尔后进行平端克隆。我们利用T-载体克隆的原理,酶切、     

高效单价特异抗A型肉毒兔血清的制备

目前关于纯的肉毒类毒素及其抗血清的制备研究较少。纯抗原及纯抗血清不仅对肉毒毒素结构和功能的研究起重要作用,而且对于提高类毒素的免疫效果与抗毒素的治疗效果;减