17β雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞术检测不同浓度E2 (0-100nmol/L)在有或无血清状态下对传代VSMC凋亡及其相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响;并采用免疫荧光染色和共聚焦激光扫描荧光显微镜术对Bax的分布进行定位.结果在有或无血清条件下,当浓度达到10 nmol/L以上时,E2 引起VSMC Bax蛋白表达上升及Bax/Bcl-2比值的改变,并促进VSMC凋亡.这一效应有随E2剂量和作用时间增高的趋势.结论 E2可通过上调Bax蛋白表达而诱导VSMC凋亡.     

体外证据不支持5-氮胞苷诱导骨髓基质细胞向心肌细胞分化

目的探讨胞嘧啶类化学物质5-氮胞苷是否可诱导体外培养的骨髓基质细胞 (marrow stromal cells, MSCs)向心肌细胞分化.方法用不同浓度(3, 5, 10 μmol/L)的5-氮胞苷以各种方法(一次处理与反复处理)诱导原代及传代MSCs.采用免疫荧光及Western Blot技术检测心肌特异性肌球蛋白重链 (myosin heavy chain α/β, MHCα/β)及肌钙蛋白I(troponin I, Tn I)的表达;并用心室肌特异性肌球蛋白轻链(ventricular myosin light chain 2, MLC2v)启动子(250 bp)控制的增强型蓝绿色荧光蛋白(enhanced cyan fluorescent protein, ECFP)报告基因表达技术检测被诱导MSCs是否发生MLC2v的转录启动.上述检测技术的特异性和可靠性用培养的心肌细胞进行验证.结果在本试验最长观察时间内(30 d),各种浓度及各种方法5-氮胞苷诱导的MSCs培养物中未见细胞自发搏动、肌管形成、心肌特异性MHC和Tn I表达;亦无MLC2v转录启动阳性细胞出现.结论从转录启动到翻译后水平的证据均不支持体外5-氮胞苷处理可诱导MSCs表达心肌特异性蛋白.