丹皮酚通过酸性鞘磷脂酶/ 神经酰胺通路改善血管紧张素II 所致动脉内 皮功能障碍

目的:探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对血管紧张素II(AngiotensinⅡ,AngⅡ)所致动脉内皮功能障碍的保护作用及其机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Westernblot检测酸性鞘磷脂酶(acidsphingomyelinase,ASM)基因及蛋白表达;采用免疫组织荧光检测血管环神经酰胺(ceramide,Cer)含量变化;采用血管环张力描记技术检测主动脉血管环的舒张功能;采用二氢乙啶荧光探针(dihydroethidium,DHE)检测血管环超氧阴离子(superoxideanion,O2-·)水平。结果:与对照组相比,AngⅡ孵育后主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的舒张反应显著降低,Pae与AngⅡ共孵育则无明显改变;AngⅡ及Pae孵育后,动脉对硝普钠(sodiumnitroprusside,SNP)的舒张反应均无明显变化;AngⅡ孵育可增高动脉环O2-·水平,这一反应被Pae明显抑制;与对照组相比,AngⅡ孵育动脉ASMmRNA水平无明显改变,但蛋白表达显著增加,Cer含量显著增多,Pae与AngⅡ共孵育动脉ASM蛋白及Cer水平与对照组相比均无明显改变;采用神经酰胺酶抑制剂N-oleoylethanolamine(OEA)增加动脉Cer含量后,Pae降低动脉O2-·水平以及增强Ach舒张反应的效应被显著抑制。结论:Pae通过ASM/Cer通路改善AngⅡ所致动脉氧化应激增强和内皮功能障碍。     

缺氧条件下GC-1细胞凋亡的作用机制研究

以小鼠精原细胞系GC-1细胞为研究对象,探讨缺氧条件下GC-1细胞凋亡潜在的分子机制。首先,采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测不同缺氧时间处理下的细胞活力,以确定细胞缺氧损伤的时间;然后,通过化学荧光法检测GC-1细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)的含量,采用JC-1法检测线粒体的膜电位,采用比色法检测ATP的含量,采用线粒体荧光探针法检测线粒体的数量与分布,并采用透射电镜观察细胞的超微结构;最后,利用实时荧光定量PCR检测线粒体信号通路相关基因胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素c (cytochrome c, Cyt-c)、Bax和Bcl-2的m RNA表达水平。结果显示,缺氧36 h后,细胞活力为(60.36±5.40)%,符合后续实验需求;在缺氧条件下, GC-1细胞中的ROS含量显著增加, ATP含量显著下降,线粒体膜电位下降、数量减少,同时细胞中促凋亡相关基因的表达水平上调,抗凋亡因子Bcl-2的基因表达水平下调。实验结果初步表明,缺氧可导致GC-1细胞线粒体功能障碍, ROS/线...     

四周尾部悬吊大鼠颈总动脉MMP9和TIMP1的表达及活性改变

目的:探讨四周尾部悬吊模拟失重大鼠颈总动脉基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein9,MMP9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)的基因、蛋白表达及酶活性变化。方法:采用4周(week,wk)尾部悬吊大鼠模拟失重影响,通过透射电镜检测颈总动脉壁基质含量,实时定量聚合酶链式反应检测MMP9和TIMP1的mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测其蛋白表达和分布,明胶酶谱法测定MMP9活性水平。结果:与对照组相比,悬吊组大鼠细胞外基质面积较对照组显著增加(P0.05),胶原蛋白含量显著增加(P0.05);悬吊组大鼠颈总动脉MMP9的m RNA表达量无明显改变,而其蛋白表达量和酶活性均显著降低(P0.05);TIMP1 mRNA和蛋白表达量则显著升高(P0.05)。结论:模拟失重使大鼠颈总动脉MMP9水平降低,TIMP1水平升高,可能与其管壁基质增生和胶原蛋白含量增加有关。