HA纳米载体介导转hGM-CSF基因的HepG2疫苗诱导的 抗瘤效应研究

目的:观察HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因的HepG2细胞疫苗体外抗肿瘤效应,为hGM-CSF基因修饰的HepG2细胞疫苗的临床应用提供依据。方法:HA纳米颗粒载体介导hGM-CSF基因转染HepG2细胞制备转GMCSF基因的HepG2细胞疫苗。密度梯度离心法分离人PBMC,体外诱导人PBMC。WST-1法测定PBMC的增殖活性及对HepG2细胞的杀伤效应,流式细胞术分析CD4+和CD8+的阳性表达率,ELISA法测定INF-γ的分泌。结果:WST-1结果显示,转基因HepG2组疫苗能诱导PBMC增殖,其增殖率优于野生型疫苗(p<0.05);其诱导的PBMC对HepG2的杀伤率高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。FCM结果显示,转基因HepG2疫苗组PBMC中CD4+和CD8+阳性表达率均高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。ELISA结果显示,转基因组PBMC培养上清中IFN-γ含量为1989.76±254.21pg/ml,高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。结论:HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因能增加HepG2细胞疫苗的免疫原性,转hGM-CSF基因HepG2细胞疫苗可有效诱导PBMC增殖、分化,增加INF-γ的分泌,提高其对HepG2细胞的杀伤作用。     

HA 纳米载体转hGM-CSF 基因的HepG2 疫苗的抗肿瘤活性研究

目的:评价HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗的抗肿瘤活性。方法:SCID小鼠20只腹腔内注射健康志愿者外周血淋巴细胞(1×107/ml)1.0 ml,同时背部皮下接种人肝癌HepG2细胞(1×107ml)0.2 ml。当皮下移植瘤体积长至100 mm3时,随机分四组:Ⅰ组,60Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞组,Ⅱ组,60Co照射的HepG2细胞组,Ⅲ组,生理盐水组,Ⅳ组,接种前,每组5只。MTT法检测各组小鼠脾细胞CTL活性,ELISA法检测血清IL-4和IL-12的水平。结果:转染GM-CSF基因的HepG2疫苗组小鼠脾细胞CTL活性明显高于其余组(P<0.05);同时血清Th1类细胞因子IL-12的水平明显升高(P<0.05),而Th2类细胞因子IL-4的水平无统计学意义(P>0.05)。结论:HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗可刺激机体产生特异性免疫反应。     

HA纳米载体介导转hGM-CSF基因的HepG2疫苗诱导的抗瘤效应研究

目的：观察HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因的HepG2细胞疫苗体外抗肿瘤效应,为hGM-CSF基因修饰的HepG2细胞疫苗的临床应用提供依据。方法：HA纳米颗粒载体介导hGM-CSF基因转染HepG2细胞制备转GMCSF基因的HepG2细胞疫苗。密度梯度离心法分离人PBMC,体外诱导人PBMC。WST-1法测定PBMC的增殖活性及对HepG2细胞的杀伤效应,流式细胞术分析CD4＋和CD8＋的阳性表达率,ELISA法测定INF-γ的分泌。结果：WST-1结果显示,转基因HepG2组疫苗能诱导PBMC增殖,其增殖率优于野生型疫苗（p〈0.05）;其诱导的PBMC对HepG2的杀伤率高于各野生型疫苗组和各空白对照组（p〈0.05）。FCM结果显示,转基因HepG2疫苗组PBMC中CD4＋和CD8＋阳性表达率均高于各野生型疫苗组和各空白对照组（p〈0.05）。ELISA结果显示,转基因组PBMC培养上清中IFN-γ含量为1989.76±254.21pg/ml,高于各野生型疫苗组和各空白对照组（p〈0.05）。结论：HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因能增加HepG2细胞疫苗的免疫原性,转hGM-CSF基因HepG2细胞疫苗可有效诱导PBMC增殖、分化,增加INF-γ的分泌,提高其对HepG2细胞的杀伤作用。     

转hGM-CSF基因HepG2细胞疫苗侵袭性和生长活性初步检测

目的：探讨经60Co处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性变化。方法：体外培养三种肝癌细胞（①野生型HepG2肝癌细胞②转染hGM-CSF基因的HepG2肝癌细胞③60Co射线处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗）采用MTT方法检测三种细胞在24h、48h、72h的OD值并绘出生长曲线;利用transwell小室进行体外侵袭实验来观察上述三种细胞侵袭性;用RT-PCR技术检测上述三种细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）在mRNA水平上表达的变化;结果：经60Co照射处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗组OD值在相同培养时间点较其他两组明显变小且差异有显著性（P〈0.05）。三种细胞（上述①②③种细胞）transwell侵袭试验显示：③组穿过人造基底膜的细胞数量明显少于前两组;PT-PCR示：③组细胞的MMP-2的mRNA的表达明显低于①②。结论：经过60Co处理过的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性均明显降低。     

转hGM-CSF 基因HepG2 细胞疫苗侵袭性和生长活性初步检测

目的:探讨经60Co处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性变化。方法:体外培养三种肝癌细胞(①野生型HepG2肝癌细胞②转染hGM-CSF基因的HepG2肝癌细胞③60Co射线处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗)采用MTT方法检测三种细胞在24h、48h、72h的OD值并绘出生长曲线;利用transwell小室进行体外侵袭实验来观察上述三种细胞侵袭性;用RT-PCR技术检测上述三种细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)在mRNA水平上表达的变化;结果:经60Co照射处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗组OD值在相同培养时间点较其他两组明显变小且差异有显著性(P<0.05)。三种细胞(上述①②③种细胞)transwell侵袭试验显示:③组穿过人造基底膜的细胞数量明显少于前两组;PT-PCR示:③组细胞的MMP-2的mRNA的表达明显低于①②。结论:经过60Co处理过的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性均明显降低。