棉花纤维发育相关基因GhPRP10的克隆及其功能分析

利用电子序列拼接结合RT-PCR技术,从12DPA(开花后天数)棉纤维中克隆到1个编码富含脯氨酸蛋白(PRPs)基因,命名为GhPRP10(登录号KP036633)。GhPRP10基因开放阅读框为684bp,编码228个氨基酸,其中脯氨酸(Pro)含量为34.6%。序列分析发现GhPRP10蛋白具有N端信号肽和富含脯氨酸区域,属于第一类PRPs。实时荧光定量PCR(RT-PCR)结果显示,GhPRP10在棉纤维组织中优势表达,在纤维发育过程中的表达量呈现先升高后降低的趋势,在18DPA纤维中表达量最高。利用Gateway技术构建植物过量表达载体,转入烟草BY-2悬浮细胞,表型观察和细胞长度测量结果显示,转GhPRP10基因细胞比野生型细胞显著增长。根据该基因的组织表达特征和转基因细胞表型分析,推测GhPRP10基因在纤维伸长和次生壁合成过程中发挥作用。     

棉花GhMYB113基因的克隆与表达分析

该研究利用序列拼接并结合RT-PCR技术,从棉花叶片中克隆了1个MYB基因的cDNA序列,命名为GhMYB113。序列分析表明,该基因开放阅读框为738bp,编码246个氨基酸,含有2个MYB结构域,属R2R3-MYB类型转录因子。该基因的基因组序列长1 927bp,由3个外显子和2个内含子构成。氨基酸序列比对发现该蛋白与其他物种的MYB蛋白有较高的一致性。系统进化分析显示,棉花GhMYB113与现代杂交月季亲缘关系最近。qPCR分析发现,该基因在棉花根中优势表达,在干旱、高盐及低温胁迫后表达量均发生变化,推测GhMYB113可能在植物响应干旱、高盐及低温等非生物胁迫过程中起作用。     

TGR5和CDX2在胃黏膜肠化生及胃癌中的表达及意义

目的:探讨G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,TGR5)和尾型同源盒2(Caudal type homeobox 2,CDX2)在胃黏膜肠化生(Intestinal Metaplasia,IM)及胃癌中的表达和意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测TGR5和CDX2在57例慢性胃炎、85例IM、98例胃癌组织中的表达。比较各组间TGR5和CDX2的表达差异,并分析其与胃癌临床病理参数的关系及与胃癌患者预后的关系。利用Spearman秩相关检验分析TGR5和CDX2表达的相关性。结果:IM和胃癌组织中TGR5的高表达率分别为54.1%和58.2%,二者比较无显著差异(P0.05),但均显著高于慢性胃炎组织(P0.01)。TGR5高表达与胃癌患者TNM分期(III+IV期)(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)及预后较差(P=0.006)相关。胃癌组织中CDX2的高表达率(30.6%)较IM组织(48.2%)显著降低(P0.05),但其均显著高于慢性胃炎组织(P0.01)。CDX2高表达与胃癌患者TNM分期(I+II期)(P=0.008)、无淋巴结转移(P=0.014)、预后较好(P=0.023)相关。TGR5和CDX2表达在慢性胃炎和IM中无相关性(P0.05),在胃癌中呈显著正相关(P=0.003)。结论:TGR5和CDX2在IM和胃癌组织中均显著上调,可能参与了IM和胃癌的发生发展。     

外周血miR-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断及预测价值

目的:探讨外周血mi R-17-92簇对早期胃癌的诊断价值,为胃癌的早期诊断及治疗提供参考依据。方法:收集胃癌125例(Ⅰ期35例,Ⅱ期28例,Ⅲ期39例,Ⅳ期23例)和癌前病变24例(包括肠化生及上皮内瘤变),同时选择65例慢性胃炎作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测患者血清中的mi R-17-92基因簇的表达水平。通过受试者工作曲线(Receiver Operating Curve, ROC)及曲线下的面积(Area Under the Curve,AUC)评估mi R-17-92基因簇表达水平诊断早期胃癌的敏感性和特异性。结果:(1)慢性胃炎与癌前病变mi R-17-92基因簇表达比较无显著差异(P0.05);(2)早期胃癌及进展期胃癌mi R-17-5p表达明显高于慢性胃炎(P0.05),mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p和mi R-92a-3p表达则显著低于慢性胃炎及进展期胃癌(P0.05);(3)miR-17-5p诊断早期胃癌的曲线下面积较mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p及CEA更高;(4)miR-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p高低表达组与在胃癌的浸润深度间有显著性差异(P0.05),mi R-19b-3p高低表达组在胃癌的临床分期间有显著性差异(P0.05);(5)miR-17-5p、mi R-19a-3p、mi R-19b-p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p诊断早期胃癌的阳性率较CEA、CA199高。结论:外周血mi R-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断价值明显优于CEA和CA199,这可能为胃癌的早诊早治提供新的策略。