无血清培养高密度乳猪肝细胞的形态和功能变化

本文研究了无血清培养高密度猪肝细胞的形态和功能变化。将分离的肝细胞以高密度(1×10~7/ml)培养在含激素、多种生长因子和营养成分的无血清培养基中,动态观察培养7天中肝细胞形态、活率、蛋白质合成功能、G-6-Pase活性、安定转化功能及LDH含量;同时以无血清培养低密度(5×10~5/ml)肝细胞作为对照组。研究结果表明:高密度培养的 肝细胞各项功能较低密度培养的肝细胞为低;高密度培养的肝细胞的形态、蛋白质合成功能在培养7天中保持稳定;活率随着培养时间的延长而下降,但均高于90％;安定转化功能在培养第2、3天最强;G-6-Pase活性在培养1天后明显下降,然后维持在较低水平;LDH含量在第1、2、3天较高。     

2%·5亿活孢子/克阿维菌素·淡紫拟青霉粉剂在烟草上的残留检测方法

建立了一种高效液相荧光色谱法(HPLC-FLD)测定烟草基质中阿维菌素残留量的方法。土壤用二氯甲烷直接萃取;烟草经二氯甲烷溶液进行二次提取,经旋转蒸发仪浓缩(45℃)近干,添加乙腈1 mL定容,再加入N-甲基咪唑和三氟醋酸酐各0.3 mL,避光衍生化30 min,再加入无水甲醇1 mL,避光醇化30 min。采用HPLC-FLD检测阿维菌素残留量。阿维菌素的添加浓度为0.005~0.202 mg/kg时,在土壤中的平均回收率为76.89~94.26%,相对标准偏差为5.18~7.09%。在烟叶中的平均回收率为87.32~96.15%,相对标准偏差为5.69~6.75%。     

乳猪肝细胞短期培养后的低温保存

本文对乳猪肝细胞短期培养后冻存法和直接冻存法进行比较。采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞,将肝细胞接种到含10％DMSO、激素、生长因子和10％NBS的RPM1 1640培养基中,用阶段性冻存法保存肝细胞,分别对直接冻存和培养后冻存10天、20天复苏的肝细胞进行培养,动态观察其活率和功能。研究结果表明各组复苏后的肝细胞均保持较高的活率;短期培养后冻存组肝细胞活率、G-6-Pase活性、白蛋白和葡萄糖合成功能及安定转化能力均较直接冻存组为高;LDH活性低于直接冻存组;冻存时间的长短对其白蛋白、尿素和葡萄糖合成功能有一定影响。因此,短期培养后冻存法较直接冻存法为好。     

凝固酶阴性葡萄球菌耐药基因和粘附基因检测及耐药性分析

目的了解凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）耐药基因和粘附基因的分布及其耐药性情况。方法收集45株凝固酶阴性葡萄球菌临床分离株,采用PCR检测其耐药基因mecA和粘附基因c弘知如B,并分析其耐药性。结果（1）凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、cva、fn6pB的阳性率依次为86．7％（39／45）、11．1％（5／45）、71．1％（32／45）。（2）凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCoNS）的检出率为88．9％,对β-内酰胺类抗生素的耐药率都在80％以上,对利福平、左氧氟沙星、林可霉素的耐药率较低,未发现对万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。结论CoNS中MRCoNS检出率很高,对常用抗生素耐药率高,且有一定的粘附能力,临床上应该根据药敏试验结果慎重及合理的使用抗生素。     

3%噻霉酮水分散粒剂在烟草和土壤中的残留检测方法

建立了一种超高效液相色谱法(UPLC)测定烟草基质中茚虫威残留量的方法。土壤用乙酸乙酯直接萃取;烟草经乙腈溶液提取,旋转蒸发去乙腈后水相经二氯甲烷液液分配浓缩后采用UPLC-PDA检测茚虫威残留量。仪器的最小检出量为2.0×10-14g,土壤的添加水平为0.01~1.0 mg/kg,烟草的添加水平为0.1~1.0mg/kg,茚虫威的平均回收率为73.34~84.90%,相对标准偏差为3.81~5.64%。该方法适合于水稻基质中茚虫威含量的快速准确测定。     

基于能值理论的循环复合农业生态系统发展评价——以福建省福清星源循环农业产业示范基地为例

循环农业是当前农业可持续发展理念的具体运作模式。对能值分析方法优化,使其更适合循环复合生态系统的应用上进行优化,并以福建省福清星源循环农业产业示范基地为例验证,评价复合生态系统的可持续发展程度和经济效益。结果表明改进的能值分析方法对循环复合农业生态系统的可持续发展评价更科学,复合系统的可持续发展指数比单纯的生猪养殖提高23.44%—33.86%,在4种组合的循环模式中以"生猪养殖-沼气工程-有机肥生产-种植业"循环复合生态系统整体效益最佳,其可持续发展指数最高,环境负载率最低,净能值产出率仅略低于"生猪养殖-沼气工程-种植业"复合系统。     

原位胶原酶循环灌注法分离猪肝细胞

本文建立了原位胶原酶循环灌注分离猪肝细胞方法并与离体两步胶原酶灌注法进行了比较。猪门静脉和下腔静脉分剐插管,先用D-Hanks液灌注,再采用自制的循环灌流装置进行胶原酶循环原位灌注分离猪肝细胞,分离后的肝细胞以5×105/ml培养,观察分离和培养7d的肝细胞产量、活率、蛋白质合成功能、葡萄糖合成功能和LDH含量。同时测定离体组的上述指标。研究结果表明采用原位胶原酶循环灌注法每克肝组织分离获得的肝细胞总量为5.1×107,肝细胞活率98.6％,培养7d肝细胞活率89.5％。肝细胞的蛋白质合成功能在培养7d中保持稳定;葡萄糖合成功能从1d时1.05±0.15nmol/cell下降到3d时0.74±0.09nmol/cell;LDH含量在3d较高。原位胶原酶循环灌注法分离的猪肝细胞总量、活率高于离体法;蛋白质合成功能和葡萄糖合成功能强于离体法。因此,原位胶原酶循环灌注分离猪肝细胞方法可获得大量高活率和良好功能的猪肝细胞。     

猪肝细胞和培养上清液中猪内源性逆转录病毒的检测

建立了猪肝细胞及其培养上清液中猪内源性逆转录病毒(PERV)的检测方法,探讨了其在猪肝细胞生物人工肝应用中的意义。以PERV gag基因为靶序列,选用特定的引物,PCR检测中国实验用小型猪肝细胞PERV前病毒DNA;RT-PCR检测猪、犬、大鼠以及HBV阳性病人血清和猪肝细胞培养6h、24h时的上清液PERV RNA,同时检测猪肝细胞猪线粒体DNA(mtDNA)。研究结果表明：检测5份中国实验用小型猪血清、肝细胞及培养猪肝细胞24h时的上清液PERV均为阳性,而5份培养猪肝细胞6h时的上清液、5份犬血清、5份大鼠血清和5份HBV阳性病人血清PERV检测结果均为阴性,猪肝细胞中均可检测到猪mtDNA。因此,中国实验用小型猪肝细胞携带PERV;PERV可释放到血清中;猪肝细胞培养24h后该病毒颗粒已释放到培养液中;PCR和RT-PCR方法检测PERV具有特异性强、简便的特点。     

两种临床标本中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力的检测与其耐药特征的研究

目的研究两种临床标本来源中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）生物膜形成能力和抗菌药物耐药率,并探讨二者的关系,为临床检测和治疗提供依据。方法收集温州医学院附属第二医院2009年1月至2010年12月的分离鉴定的MRSA共128株,其中脓液59株,痰液69株;采用刚果红平板检测多糖粘附素（PIA）,半定量粘附试验检测生物膜表型,PCR检测icaA基因结果用z。分割法进行统计分析。结果128株MRSA中生物膜阳性菌株为61株,其中脓液36株、痰液25株,脓液中检出生物膜的阳性率明显高于痰液中检出生物膜的阳性率（x2=7．382,P=0．005）。MRSA对所有B．内酰胺类抗生素全耐药,对万古霉素和利奈唑胺全敏感,痰液中MRSA对利福平、庆大霉素、环丙沙星的耐药率显著高于脓液中MRSA的耐药率（P〈0．05）,但是痰液中MRSA对克林霉素的耐药率要显著低于脓液中MRSA的耐药率（P〈0．05）。脓液中生物膜阳性菌株和生物膜阴性菌株对抗菌药物的耐药率差异无统计学意义（P〉0．05）,但是痰液中生物膜阳性菌株对克林霉素的耐药率高于生物膜阴性菌株的耐药率（P〈0．05）,对利福平的耐药率显著低于生物膜阴性菌株的耐药率（P〈0．05）。结论脓液中MRSA的生物膜检出率比痰液高,但是脓液中MRSA的耐药率比痰液中的耐药率要低,MRSA对抗菌药物的耐药谱和生物膜的形成并无直接的关系。