真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG的构建及在HeLa细胞中的表达

为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目的片段重组至pcDNA3.1(-)中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定后,构建了带有Kozak序列和核定位信号的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG。真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG被转染试剂Su-perfect转染至HeLa细胞中,绿色荧光蛋白基因在HeLa细胞中得到表达而且在细胞核中观察到绿色荧光。该研究以绿色荧光蛋白为标记初步建立了活体观察真核细胞核动态变化的研究体系。     

细胞生物学试题库的建设及思考

在分析细胞生物学课程重要性和试题库建设的必要性基础上,在细胞生物学入库试题的设计和选择、试题库的管理和运行等方面进行了探索,并提出开展题库建设及应用中需要注意的几个问题。     

蛋白激酶A锚定蛋白95的生物学功能

蛋白激酶A锚定蛋白95(AKAP95),具有在细胞核内锚定蛋白激酶A(PAK)的作用.最近的研究结果发现AKAP95参与细胞内许多重要的生命过程,如参与细胞分裂染色体集缩的建立和集缩状态的保持,参与基因表达调控、DNA复制以及维持mRNA的稳定,参与胚胎发育,参与细胞凋亡以及参与细胞周期调控等.简要介绍了PKA和蛋白激酶A锚定蛋白(AKAPs),并综述了AKAP95的结构、细胞周期分布以及新近发现的AKAP95的重要生物学功能.     

真核生物集缩素SMC2/SMC4异二聚体的结构解析研究进展

真核生物集缩素(condensin)的主要作用是在细胞周期过程中调控染色体的动态变化。它是一种含5个亚基的蛋白质,由1个起核心催化作用的SMC2(structure maintenance of chromosomes 2)/SMC4异二聚体和3个起调节作用的非SMC亚基组成。目前,关于集缩素中SMC2/SMC4异二聚体的体内构象和分子作用机制仍不清楚。最近,对SMC2/SMC4异二聚体的结构解析取得许多新进展。该文在简要介绍SMC蛋白的基本结构、真核生物集缩素的发现、真核生物集缩素的结构组成的基础上,对近年来SMC2/SMC4异二聚体的结构解析的研究进展作一综述,以期为相关研究提供参考。     

简并PCR技术及其在基因克隆中的应用

本文简要介绍简并PCR技术,包括什么是简并引物,如何设计简并引物,进行简并PCR的反应条件,应用简并PCR获得全长基因的方法和简并PCR技术的应用范围,并对简并PCR技术的局限性及其新进展进行讨论。在此基础上,简述基因的克隆策略以及简并PCR技术在基因克隆中的应用。简并PCR技术是寻找和发现“新”基因或蛋白质家族新成员的一种非常有用的工具。 Abstract:Degenerate PCR is introduced in this paper,including what is degenerate PCR,how to design degenerate primers,how to optimize degenerate PCR parameters,how to applying degenerate PCR to obtain full-length gene and which fields can apply degenerate PCR.The limits and recent advances of degenerate PCR are also discussed.Based on this introduction,strategies of gene cloning and applications of degenerate PCR in gene cloning are summarized in brief.Degenerate PCR is a very useful tool for searching and discovering new genes and new members of a protein family.