人脂皮素-1cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

脂皮素1(LC1)是钙依赖性的膜磷脂结合蛋白,介导糖皮质激素的抗炎作用。本研究采用RTPCR法获取人LC1cDNA,以pUC18为克隆载体、pBV220为表达载体,在DH5α菌成功表达了LC1,免疫印迹实验证实了重组蛋白的免疫活性 。     

特异性血清中白介素1β放射免疫分析的建立及初步应用

人工重组的白细胞介素１β（ＩＬ－１β）多次免疫兔和豚鼠,获取高效价的兔抗ＩＬ－１β抗体。用氯氨Ｔ法制备１２５Ｉ标记ＩＬ１β,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５纯化。该法测定范围０．０６-４ｎｇ／ｍ ｌ,批内和批间误差分别小于５％ 和１０％ 。正常人血清含量为０．２４±０．０８ｎｇ／ｍ ｌ（ｎ＝１３８）。人粒细胞系ＨＬ６０（１０６）细胞体外培养２４ 小时,不能检出上清液中ＩＬ－１β,钙离子载体Ａ２３１８７和磷脂酶Ａ２ 抑制Ｐ－ＢＰＢ也不能显著提高细胞释放ＩＬ－１β。另外,肝癌甲胎蛋白阳性患者血清中ＩＬ－１β水平同正常人没有显著差异。但是,雄性老龄大鼠血清ＩＬ－１β水平明显高于雌性老龄大鼠（Ｐ＜ ０．０１） 。     

特异性白介素1受体拮抗蛋白放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素1受体拮抗蛋白(I1ra)免疫新西兰兔,获取高效价特异的IL1ra抗体。用氯氨T氧化法制备125I标记IL1ra,经SephadexG25纯化,竞争性抗原抗体反应采用非平衡法,标准品和待测样品同抗体反应37℃6小时后加入125I标记抗原继续反应4℃24小时。经PR试剂分离结合和分离的标记抗原。该法标准曲线范围3～96ngml,最低检出量为(90±14ngml,n=89),类风湿因子阳性的病人血清含量为(3906±1523ngml,n=14)。肠缺血再灌损伤后6小时大鼠血清中IL1ra较伤前自身对照明显增加(P<0001,n=82)。肺灌洗液中损伤前后没有明显差异。该法特异、灵敏、简便,可用于人血清和大鼠血清及肺灌注液中IL1ra的分析 。     

高灵敏白介素6放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素6(IL-6)多次免疫兔和豚鼠,获取高效价的IL-6抗体.用氯氨T法制备 ¹²⁵I标记IL-6,经Sephadex G-25纯化,抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温育24 h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围0.1～3.2 μg/L最低检出量为0.l μg/L,批内和批间误差分别小于6.4％和10％.健康男性115例血清IL-6含量为(0.27±0.13) μg／L.女性101例血清IL-6为(0.26±0.10) μg/L.男女无差异.此外,用该法检测兔失血性休克再灌注损伤后24 h血清IL-6水平明显升高.失血性休克大鼠淋巴液中IL-6水平明显上升,经山莨菪碱（l mg／kg）治疗休克后IL-6又明显下降.内毒素同人牙周纤维细胞共同培养不同时间也促进IL-6释放并明显高于对照水平.     

人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶(hMSE)的放免分析法,抗血清的亲和常数为5.1×10⁹L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.