空间细胞电融合关键技术的地基研究——烟草细胞的电融合

本文针对建立空间细胞电融合技术存在的三个主要问题进行了研究。结果表明,用低温(4℃)、融合介质(0.55 mol/L甘露醇)并添加0.1%纤维素酶保存原生质体,72 h内可以使约94%细胞维持无壁状态,同时并未使细胞丧失再生能力,基本满足从地面制备亲本细胞到在微重力条件下进行电融合,对亲本细胞保持无壁状态的要求。为减少剪切力环境对亲本细胞造成的损伤,一方面用超速离心方法对亲本细胞之一去液泡,另一方面用电泳代替蠕动泵混合亲本细胞。而且,由于原生质体壁生长与其膜电位之间存在负相关性,因此利用电泳方法可以有效地富集和优化亲本细胞。根据地面实验结果推测,空间有/无液泡亲本细胞电融合的较适合参数可能为:交流电场强度90V/cm,频率0.8 MHz,排列时间20 s,直流脉冲1.0—1.3 kV/cm,幅宽40μs,两次脉冲。     

洋葱叶肉原生质体培养再生小植株

用纤维素酶(EA 3-867)和离析酶(Macerozyme R-10)酶解洋葱叶肉细胞,游离获得大量具有活力的原生质体。在MS培养基上(附加2,4-D 2,6-BA 0.5 mg/l,原生质体能再生细胞壁,生长,分裂,形成类似球形的愈伤组织;将它们分别移入分化培养基MS_1,MS_2,MS_3,得到再生的小植株。     

马缨丹叶提取液对水葫芦叶片中超氧物歧化酶活性和过氧化氢积累的影响

水葫芦[Eichhornia crassipes（Mart）Solms]是世界上繁殖最快、危害最严重的多年生水生杂草之一。为了避免化学除草剂对水体的污染,生物防治已成为当前水葫芦治理的重要方向。马缨丹（Lantana camara）是马鞭草科的一种植物,其叶片提取物对水葫芦有很强的毒性。研究结果表明：经马缨丹叶提取液处理的水葫芦叶片中,超氧物歧化酶（SOD）活性与H2O2浓度均显著升高,但过氧化氢酶的活性受到抑制,膜脂过氧化程度明显增加。H2O2的组织化学染色结果表明H2O2在气孔细胞中有异常高的积累,H2O2过量产生同时导致水葫芦叶片失绿与细胞死亡。因此,氧胁迫可能是马缨丹提取液对水葫芦毒害的主要原因之一。     

5,6-二氯吲哚乙酸对水稻原生质体培养的影响

建立了水稻(Kagama dango mochi品种)愈伤组织悬浮细胞系,用以分离原生质体。通过5,6—二氯吲哚乙酸(5,6—Cl_2—IAA),IAA、KT及2,4—D等几种激素和生长调节物质对水稻原生质体培养影响的比较,发现单附加IAA未能诱导细胞分裂,而单附加5,6—Cl_2—IAA则诱导形成了再生愈伤组织。表明5.6—Cl_2—IAA 这一氯代生长素在原生质体培养方面具有较大的应用潜力。单附加KT也能诱导形成愈伤组织,表明启动细胞分裂并非需依赖外源生长素类物质,或生长素类物质与细胞分裂素类物质之间的协同作用。     

空间电融合的烟草原生质体再生植株分析

报告了在"神舟四号"飞船中通过电融合获得的烟草融合细胞,经地面培养获得再生植株。空间飞行样品再生愈伤组织的频率为地面对照的3倍多,而植株再生频率却比地面对照约低20%,约有32%的再生植株可能具有杂种性状。选取叶形状变化最为明显的H23号植株与黄花品种进行回交,回交一代的叶比原始材料宽,花的颜色与亲本黄花品种相同,表明空间微重力环境中融合的烟草原生质体能够再生植株,获得有繁殖能力的杂种。     

烟草叶外植体分化和脱分化过程中几种内源激素变化(简报)

普通烟草及胶烟草叶外植体分化及脱分化所要求的外源激素的激动素/生长素的比值不同,在脱分化过程中,前者的iPA含量达 720.0 ng g~(-1)FW,而后者未检测到。分化时期的ZR/GA_(4 7)或iPA/GA_(4 7)含量均高于脱分化的。     

激素对水稻原生质体培养的影响

建立了籼型水稻 KAGAMA DANGO MOCHI 品种的愈伤组织悬浮细胞系,以此分离原生质体,比较研究了5,6-Cl_2-IAA、IAA、KT 及2,4-D 等几种激素对水稻原生质体培养的影响,发现单单附加5,6-Cl_2-IAA 能诱导形成愈伤组织,而附加 IAA 则未能诱导细胞分裂,表明氯代生长索5,6-Cl_2-IAA 在原生质体培养方面具有较大的应用潜力。此外,单单附加 KT