组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）工程细胞系遗传特性及成瘤性分析

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)因其在防止血栓形成中起重要作用而受到人们的重视。但由于t-PA在血液中半衰期很短,作为溶栓药,一时难于推广。为了延长半衰期、增强其特异活性,本组构建了t-PA突变体并在CHO-dhfr~-细胞中获得了高效表达。我们在细胞培养基中加入秋水仙素,通过低张、固定、染色,进行染色体分析,结果表明,t-PA工程细胞系染色体条数为20条,畸变类型有异着丝粒。四倍体、裂隙、断片,畸变率为15％,属于正常范围。同时我们对该细胞系进行成瘤性试验,选用4周龄裸鼠作为试验鼠,以Hela细胞为阳性对照,CHO-dhfr~-细胞为阴性对照,试验表明:t-PA工程细胞及表达产物对裸鼠均无成瘤性。     

t-PA cDNA在CHO细胞中的高效稳定表达

我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过混合加压及筛选,在CHO细胞中高效表达了t-PA,表达水平达到5000～6000 IU/10~6细胞/24hr。重组t-PA具有与天然t-PA相同的分子量及酶活性。经过8个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的,其主要指标均符合工程细胞株的要求。     

原生质体诱变选育无孢平菇

用紫外线照射紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)双核菌丝原生质体,再生后筛选生长势好的菌株, 通过出菇试验得到了生产性状与紫孢侧耳一致的无孢和少孢平菇新品种。Abstract: This paper reported isolation and regeneration of the dikaryocyte protoplasts from Pleurotus sapidus, and the protoplasts were treated by U.V-irradiation for selection spore less mutants.     

卡那霉素链霉菌噬菌体sKJl——温和性噬菌体

从土壤中分离出一株卡那霉素链霉菌噬菌体SKJl,该噬菌体在卡那霉素链霉菌及林肯链霉菌菌苔上产生混浊的噬菌斑。从噬斑中长出的菌落后代对SKJl噬菌体的感染产生了抗性。单株传代未见自发释放游离噬菌体。紫外线照射亦未发现诱导现象。抗性菌株经10ug／ml丝裂霉素C处理后,其中一株能释放出约5．9×103pfu／ml游离噬菌体颗粒,推测这些抗性菌株可能是溶源性菌株。菌落原位杂交实验证实抗性菌株的DNA与SKJl噬菌体DNA有同源性,说明这些抗性菌株已被SKjL噬菌体溶源化,从而确证SKJl噬菌体为一温和性噬菌体。     

具有废水处理潜力的微生物生物修复策略

随着工业化和城市化的不断发展,废水排放量不断增加,废水污染已成为一个严重的环境问题。传统的废水处理技术如物理处理、化学处理等存在高能耗、高成本等问题,不能很好地满足废水处理的需要。基于此,文章分析了微生物修复策略在废水处理中的应用现状及研究进展,探讨了微生物生物修复策略在废水处理应用中的优势和不足,指出了今后需要加强的方面。     

固定化犁头霉菌在含有丙二醇的体系中转化RSA为皮质醇

皮质醇是重要的甾体激素类药物之一,目前国内采用的紫色犁头霉菌（Absidia orchidis）催化11-脱氧皮质醇醋酸酯（RSA）生成皮质醇。RSA着先转化为中间体11-脱氧皮质醇（RS）,在11-位羟化酶作用下生成皮质醇（β体）和表皮质醇异构体（a体）及少量副产物,其中β体为目的的产物。反应是在水相中进行的,存在着反应底物浓度低,皮质醇产率低,仅为45%~50%,β体与a体的比值（β/a）为0.9-1.2且不能连续生产等问题^[1].有文献报道^[2-3],在反应体系中加入有机溶剂可影响酶催化的立体选择性。为此本文采用固定化细胞,在反应体系中添加一定量1.2-丙二醇,以增加底物（RSA）的溶解性,并试图提高产物中β/a值,提高β体的产率。     

一种纯化双链DNA测序模板的有效方法

以变性质粒ＤＮＡ为模板的核苷酸序列分析（又称双链ＤＮＡ测序）的结果会受到诸多因素的影响。然而,模板的制备及其纯度显得尤为重要。本试验对以三种方法纯化的质粒为模板的测序结果作了比较,结果显示．能为普通实验室所采纳的二氧化硅吸附法操作上简单、重复性好,其结果可与Ｍ１３顺序分析系统相媲美。     

东北鼢鼠种群生长指标的主分量分析

东北鼢鼠种群生长指标的主分量分析ＰＲＩＮＣＩＰＡＬＣＯＭＰＯＮＥＮＴＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＧＲＯＷＴＨＩＮＤＥＸＯＦＰＯＰＵＬＡＴＩＯＮＦＯＲＭＡＮＣＨＵＲＩＡＮＺＯＫＯＲ（ＭＹＯＰＡＬＡＸＰＳＩＬＵＲＡＳ）东北鼢鼠（Ｍｙｏｐａｌａｘｐｓｉｌｕｒａｓ...