椰心叶甲CYP4基因的克隆及绿僵菌侵染后的诱导表达研究

根据细胞色素P450家族4（CYP4）的氨基酸保守序列设计1对简并引物,从椰心叶甲Brontispa longissima成虫总RNA中扩增得到5个cDNA片段（GenBank登录号: DQ238840－DQ238844）。以3′-RACE法获得片段BLWH4的3′端序列,推导的氨基酸序列表明其结构中含有CYP家族的特征性保守序列： 螺旋K区的ETLR和血红素结合区的F××G×××C×G。以18S 为对照的RT-PCR分析表明,BLWH4在成虫的mRNA表达量远大于幼虫。绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株MA-3和MA-4侵染椰心叶甲成虫及5龄幼虫后,BLWH4的mRNA表达增强,提示BLWH4可能具有增强椰心叶甲抵抗绿僵菌侵染的作用。     

绿僵菌侵染对椰心叶甲酚氧化酶活性的影响

对椰心叶甲Brontispa longissima(Gestro)成虫血淋巴中酚氧化酶的特性进行分析,并研究绿僵菌(Metarhizium anisopliae)侵染对血浆甲酚氧化酶活性的影响。结果显示,椰心叶甲成虫的血浆及血细胞裂解液中均检测到酚氧化酶活性,且昆布多糖及胰蛋白酶可显著提高其活性。绿僵菌MA-4侵染组在侵染后第1至第5d的血浆酚氧化酶活性高于未侵染组(P<0.05),但是椰心叶甲成虫体内注射10μg昆布多糖后,侵染组的酚氧化酶活性显著低于未侵染组(P<0.05),表明绿僵菌一方面对可激活椰心叶甲的酚氧化酶原激活系统,另一方面又可抑制昆布多糖对椰心叶甲酚氧化酶原激活系统的诱导作用。