长链非编码RNA H19促进肝癌细胞增殖和侵袭

目的:肝癌是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤,但其发病机制目前仍不明确.虽然长链非编码RNA的异常表达与多种肿瘤的发生密切相关,但在肝癌中的报导尚不多见.因此,本文将探讨长链非编码RNA H19在肝癌组织和正常组织中表达差异,进一步检测其对肝癌细胞增殖和侵袭活性的调控及其分子机制,为开发长链非编码RNA的临床诊断试剂提供实验依据.方法:收集20例肝癌手术患者的癌变组织和20例正常组织,通过real time PCR检测H19的表达差异.在转染或干扰掉该H19后,采用MTT的方法检测HepG2细胞的增殖活性,通过Transwell小室的方法检测HepG2细胞的侵袭活性.结果:real time PCR检测发现H19 mRNA在肝癌组织中高表达,而在正常组织中低表达.过表达H19导致HepG2细胞过度增殖,敲除该lncRNA,细胞增殖和侵袭活性被抑制.结论:H19在肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织,并且过表达H19导致肝癌细胞增殖活性增加,而敲除H19会导致肝癌细胞的增殖和侵袭活性明显减弱.该LncRNA在肝癌组织中的过量表达有助于肝癌的临床诊断,同时H19在肝癌的恶性肿瘤生物活性中发挥着重要的作用,因此,H19是一个潜在的治疗肝癌的药物作用靶点,为开发新的抗肿瘤药物提供了新的治疗靶点.     

NAAGS基因修饰神经干细胞在创伤性颅脑损伤治疗中的研究

目的：探讨移植NAAG合酶（NAAG synthetase,NAAGS）基因修饰的神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）能否促进创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的恢复。方法：利用电穿孔转染大鼠NSCs,通过脑立体定向仪分别将PBS（模型组）、NSCs（NSCs组）、转基因NSCs（NAAGS＋NSCs组）移植到创伤性颅脑损伤（Traumatic Brain Injury,TBI）大鼠局部损伤灶边缘,通过NSS评分评价移植后大鼠神经功能的变化以及用TUNEL法检测NSCs的凋亡情况,并采用放射免疫法分析脑组织中促炎因子水平。结果：Nss评分结果显示NAAGs＋NSCs组和NSCs组在第7、14、21天神经功能评分均低于模型组（P〈0．05）;NAAGS＋NSCs组在第14和21天神经功能评分低于NSCs组（P〈0．05）;在各时间点细胞移植组比模型组的神经细胞凋亡数明显减少;转基因NSCs移植能明显降低TBI脑组织中促炎因子水平。结论：转基因NSCs移植后可以合成NAAGS促进TBI大鼠神经功能的恢复。     

脑损伤后大鼠NAAG肽酶基因沉默的神经保护

目的：探索沉默NAALADase基因的方法对骨髓间充质干细胞（BMSC）静脉移植,评价其对大鼠脑损伤后的神经保护作用。方法：体外分离培养BMSC,应用小分子干扰RNA转染方法沉默NAALADase基因的表达。建立脑损伤模型后,48h处死动物取脑组织进行Fluom—JadeB组织荧光染色以及HE染色。结果：HE染色显示沉默NAALADase基因BDNF数目明显增多并且损伤后神经元退变也减少。结论：沉默NAAG肽酶的表达后能有效实现对神经的保护作用。     

Sirt1促进肝癌细胞增殖和侵袭活性的分子机制

目的:探讨Sirt1基因在肝癌组织和癌旁组织中表达差异,进一步检测其对肝癌细胞增殖和侵袭活性的调控.方法:收集30例肝癌手术患者的病变组织和癌旁组织,通过Real time-PCR检测Sirt1基因的表达差异,并对其中6例组织通过western blot验证.在转染Sirt1基因或干扰掉该基因后,采用MTT的方法检测HepG2细胞的增殖活性,通过Transwell小室的方法检测HepG2细胞的侵袭活性.结果:Real time-PCR检测发现Sirt1 mRNA在肝癌组织中高表达,同样,Western blot检测也发现Sirt1在肝癌组织中高表达,而在癌旁组织中表达较低.过表达Sirt1导致HepG2细胞过度增殖,侵袭能力增加;相反,敲除该基因,细胞增殖和侵袭活性被抑制.结论:Sirt1在肝癌组织中高表达并且介导肝癌细胞增殖和侵袭活性.该基因在肝癌组织中的过量表达有助于肝癌的临床诊断,同时Sirt1在肝癌的恶性肿瘤生物活性中发挥着重要的作用,因此,Sirt1是一个潜在的治疗肝癌的药物作用靶点,为开发新的抗肿瘤药物提供了新的治疗靶点.