腺病毒E4启动子结合蛋白-4(E4BP4)基因在小鼠胚胎着床期间子宫组织中的表达

腺病毒E4启动子结合蛋白-4(E4BP4)是哺乳动物细胞核内的一种碱性亮氨酸拉链(bZIP)型转录因子,参与调控细胞的存活和增殖。前期研究表明,它在孕第5天的小鼠着床位点有明显的高表达。本文分别应用Northem blot、in situ杂交、Western blot和免疫组织化学技术,对E4BP4基因在小鼠妊娠初始期子宫、着床期胚胎着床位点和非着床位点的表达情况进行了研究。观察发现：在小鼠妊娠初始期,E4BP4基因在子宫组织中的表达逐步上调;至胚胎着床期间,其在胚胎着床位点的表达水平进一步提高,并明显高于非着床位点;该基因的表达不依赖于胚胎,人工蜕膜化可诱导其表达：E4BP4 mRNA和E4BP4蛋白分子都主要分布于子宫腔周围的基质细胞和蜕膜细胞。上述结果提示E4BP4基因可能通过促进着床位点基质细胞的增殖和抑制蜕膜细胞的凋亡而参与胚胎着床过程的调控。     

小鼠着床丝氨酸蛋白酶2cDNA的克隆、表达及抗体制备

以孕 4 .5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板 ,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶 2 (ISP2 )的cDNA。序列分析表明 ,该cDNA序列中的开放阅读框编码 2 79个氨基酸 ,并与文献报道完全相同 ,但在 3′非翻译区多 2 0 4bp ,已登录于GenBank(登录号 :AF4 4 2 819)。为了获得重组ISP2 (rISP2 ) ,构建了pGEX 4T 2 ISP2表达质粒 ,进而在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达融合蛋白质GST ISP2 ,经SDS PAGE回收的融合蛋白质用牛凝血酶酶切 ,再经SDS PAGE回收获得rISP2。用rISP2作为免疫原免疫家兔获得ISP2多克隆抗血清。用该抗血清进行免疫组化研究表明 ,ISP2在妊娠早期的小鼠子宫内膜腺上皮有特异性的高表达。