鸡痘病毒表达载体的构建Ⅰ、鸡痘病毒282E_4株基因组PstⅠ、HindⅢ酶切片段的克隆及酶切分析

本文介绍了鸡痘病毒２８２Ｅ４株基团组ＰｓｔⅠ片段、ＨｉｎｄⅢ片段的克隆和鉴定,以及部分克隆的限制性内切酶分析。鸡痘病毒基因组经酶切、克隆分别得到３４９个、２７７个白色菌落,经质粒电泳、菌落杂交筛选分别得到２８６、２３４个重组菌落,再经酶切、斑卢、杂交鉴定,证明了所克隆的确为鸡痘病毒的ＰｓｔⅠ、ＨｉｎｄⅢ片段。最后经单、双酶切分析,得到了５个ｐＦＰ、５个ｐＦＨ克隆的物理图谱。     

一种平末端连接的有效方法

转化效率与质粒大小成反比,而当质粒大于１５ｋｂ时,转化效率将成为限制因素,此时提高连接效率极为必要,特别是对于具有普遍性而效率又低的平末端连接。我们在连接反应体系中,加入相应的产生平末端质粒载体的限制性内切酶Ｈｐａ Ｉ、或ＥｃｏＲ Ｖ,与不加Ｈｐａ Ｉ,或ＥｃｏＲ Ｖ的连接反应相对照,连接产物转化大肠杆菌ＪＭ１０９后,产生的转化子比率分别为１９．９％和１０．３％（ｐＦｐ７）,３２．６％和９．７％（