羊栖菜多糖通过激活Caspase途径诱导Lovo细胞凋亡

研究了羊栖菜多糖（Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性变化。MTT法检测SFPS对lovo细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western印迹法测定caspase-3酶原和caspase-9的变化;RToPCR检测caspase-3 mRNA表达;caspase-3,caspase-8、caspase-9活性检测试剂盒观察caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性改变。结果显示,SFPS对lovo细胞增殖有显著抑制作用,经形态变化、DNA条带和流式细胞分析,可见明显的细胞凋亡特征。SFPS处理lovo细胞后,发现caspase-3酶原蛋白表达降低,caspase-3 mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。而在检测蛋白中,也发现caspase-9被激活进而形成具有活性的片段。另外,caspase的活性检测也进一步发现caspase-3、caspase-9的活性逐步增高。实验结果提示SFPS在体外诱导lovo胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,并且是通过激活启动caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应来实现的。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖(Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS)诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western blot法测定Caspase-3酶原的变化; RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果显示:SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC_(50)分别为375,355,178和60mg/L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征:细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5-300mg/L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带;而500mg/L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

枯草杆菌二联活菌制剂鼻饲给药治疗昏迷患者抗生素相关性腹泻的疗效观察

目的：研究枯草杆菌二联活菌制剂经鼻饲给药治疗昏迷患者抗生素相关性腹泻的临床疗效。方法：收集以2011 年1 月至 2014 年1 月本院确诊的76 例患抗生素相关性腹泻的昏迷患者作为研究对象,按随机数字表法分为对照组(38 例)和试验组(38 例),对照组在基础治疗的基础上给予鼻饲蒙脱石散收敛止泻治疗,而试验组在对照组的基础上,同时给予枯草杆菌二联活菌胶囊 （美常安）鼻饲给药治疗。对比治疗前后两组患者的症状改善情况以及粪便实验室检查指标,记录两组不良反应。结果：除治疗过 程中死亡4 例、意识转清停止鼻饲8 例外,试验组33 例,对照组31 例完成试验。试验组治疗有效率明显高于对照组的(X2=2.627, P <0.05)。给药第6d 试验组的白细胞转阴率为81.8%,明显高于对照组的30%(P<0.05),给药第6 d 及治疗后试验组的肠道菌群纠 正率分别为84.2%、94.7%,明显高于对照组的41.2%、64.7%,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组患者不良反应的发生率明显高 于试验组（P<0.05）。结论：枯草杆菌二联活菌制剂鼻饲给药可显著改善昏迷患者抗生素相关性腹泻的症状,使肠道菌群更快得以 纠正、缓解使肠道炎症,且安全性高,值得临床推广使用。     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖菜多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC_(50)分别为390,362,402,421mg/L;药物浓度为300mg/L和500mg/L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、过集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G_1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G_2/M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G_2/M期细胞阻滞有关。     

磷酸丝氨酸氨基转移酶1介导肺腺癌细胞粘附及其机制探究

摘要 目的：探究丝氨酸生物合成途径（SSP）关键酶磷酸丝氨酸氨基转移酶1（PSAT1）与肺腺癌细胞粘附的关系，并初步探讨其作用机制。方法：使用siRNA抑制PSAT1蛋白表达，观察肺腺癌细胞形态以及粘附变化，同时过表达PSAT1，反向观察PSAT1对肺腺癌细胞粘附的影响。初步探究其作用机制，采用免疫共沉淀-蛋白质谱法寻找与PSAT1直接相互作用的蛋白，筛选差异蛋白，并在过表达细胞体系中验证。结合临床公共数据库分析互作蛋白与患者预后关系。结果：发现敲低PSAT1引起肺腺癌细胞形态改变；敲低PSAT1抑制肺腺癌PC9、HCC827细胞粘附；过表达PSAT1增强PC9及HCC827细胞粘附；免疫共沉淀-蛋白质谱检测到2560个可能与PSAT1结合的蛋白，进一步通过免疫共沉淀-免疫印迹法验证PSAT1过表达使细胞中与间皮素（MSLN）结合显著上升；通过临床样本数据观察PSAT1与MSLN共同高表达的肺腺癌患者，其预后更差。结论：本文首次报道PSAT1可能通过与MSLN等蛋白-蛋白相互作用影响肺腺癌细胞粘附的新机制，提示PSAT1有望成为潜在抗肿瘤靶点，靶向其相互作用蛋白能为小分子抑制剂设计及患者个体化治疗提供新思路。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖（Sargassum Fusforme Polysaccharides．SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率：通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡：应用Westernblot法测定Caspase-3酶原的变化：RT—PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果显示：SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC50分别为375,355,178和60mg／L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征：细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5—300mg／L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带：而500mg／L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一．而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

CHO细胞无血清结团灌流培养：超声-沉降柱二合一灌流系统

利用CHO细胞能在培养过程中自然结团的特性,采用超声—沉降柱二合一灌流系统能促进细胞结团和加强截留的特性,我们用无血清培养基连续灌流培养基因重组CHO细胞MK3-A2株,分泌表达rhTNK-tPA获得了成功。培养周期为77-110天,细胞结团率为90%左右,直径在285～570μm之间,细胞截留率保持在95%左右,成活率为85%以上,细胞密度达到2×107/ml左右,rhTNK-tPA生产率平均为89 mg/L/d,最高时达216mg/L/d。 结果表明,使用该灌流系统进行细胞结团培养可以取代微载体培养用于动物细胞制药的规模化生产。     

PCR反应条件对16S rRNA基因扩增子测序准确性的影响

【背景】16S rRNA基因扩增子测序技术是一种不依赖培养而获得样本中细菌种群结构、相对丰度等信息的方法。高通量测序技术实验步骤较多,每一步骤细微的差别都可能在最终的测序结果中放大,并造成测序结果与实际情况的偏差。【目的】基于MiSeq测序平台,探讨PCR反应体系中扩增引物序列、退火温度、模板起始量、扩增循环数和变性时间等5个因素对16S rRNA基因测序结果的影响。【方法】对mock DNA的16S rRNA基因扩增子进行测序,分别分析不同的扩增引物、退火温度、模板起始量、循环数和变性时间对数据准确性的影响。【结果】不同的扩增引物对检测结果有较大的影响,采用的4组引物中,引物B (V3–V4,341F/806R)的准确性最好,引物A(V3–V4,341F/805R)次之。比较不同退火温度(52、55和60℃)对检测准确性的影响,退火温度60℃的结果最接近理论值。模板起始量(2、10和50 ng)的检测结果显示,mock DNA起始量为2ng的结果准确性最高。相较于其他3组(15+18、25+8和30+8),循环数为(20+8)的检测结果最接近mock DNA的理论值。不同变性时间(3...     

丝氨酸生物合成途径介导肺腺癌细胞EGFR-TKIs靶向治疗适应性耐药

目的:研究丝氨酸生物合成途径(SSP)在肺腺癌使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗后引起的适应性耐药中发挥的作用,探究早期适应性耐药机制以寻找抗耐药靶标。方法:使用EGFR-TKIs药物短时刺激肺腺癌细胞系后,利用Western blotting和qRT-PCR技术检测丝氨酸生物合成途径中关键酶的蛋白及m RNA水平变化,同时利用LC-MS检测细胞内丝氨酸生物合成途径产物及相关代谢产物变化情况。通过CCK8法检测敲低关键酶对细胞增殖的影响。体内实验进行肺腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤注射,采用剂量爬坡法构建体内适应性耐药模型,检测肿瘤组织中关键酶表达情况。结果:1.细胞内丝氨酸生物合成途径关键酶PHGDH、PSAT1、PSPH的蛋白表达水平在不同药物作用时间和浓度下有不同程度上调,且m RNA水平也上调了20-50%左右(P0.05);2.HCC827细胞中SSP及下游代谢通路产物如P-Serine、Serine、Glycine、AMP等均有显著性上调(P0.01);3.敲低关键酶PSAT1及PSPH后可抑制细肺腺癌细胞HCCC827及PC9的增殖,与对照组相比最高抑制率可达60%左右(P0.01);4.体内诱导PC9细胞适应性耐erlotinib后,肿瘤组织中的PHGDH及PSAT1表达均有明显上调。结论:丝氨酸生物合成途径介导了肺腺癌EGFR-TKIs靶向治疗的适应性耐药,其关键酶有望作为抗耐药靶标进行联合治疗,从而提高EGFR-TKIs靶向药物的早期疗效并最终克服耐药性的产生。