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为鉴定BRPF1的一种新转录本, 确定其在小鼠组织中的表达并对其蛋白功能进行初步研究, 将获得的克隆进行序列测定。RT-PCR和Northern blotting实验检测BRPF1和BRPF2在小鼠各组织器官中的表达, 生物信息学分析其保守结构域和蛋白功能, 并使用TNT T7体外转录翻译系统获得BRPF1和BRPF2蛋白。结果表明BRPF2是BRPF1的一种新型转录本(GenBank登录号：DQ288860); 在小鼠肝、胚胎、附睾、睾丸、卵巢和骨骼肌中均检测到 BRPF1和BRPF2两个转录本, 其中以BRPF1为主要的转录本; 而在小鼠脾中, 仅检测到BRPF2的转录本; BRPF1编码1246个氨基酸残基, 其编码的蛋白质分子量为140 kDa; 而BRPF2由于选择性剪接, 导致翻译提前终止, 仅编码442个氨基酸残基; CDD软件分析BRPF1和BRPF2结构域表明：与BRPF1相比, BRPF2蛋白缺失了Bromodomain结构域和PWWP结构域。鉴于Bromodomain结构域和PWWP结构域是BRPF1蛋白结合乙酰化或非乙酰化组蛋白, 募集组蛋白乙酰转移酶Moz和参与染色质重构的关键, 暗示BRPF2极有可能是做为BRPF1蛋白的负调控因子, 共同参与染色质调控。 相似文献
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RHOX5基因是最早发现的小鼠RHOX基因簇(reproductive homeobox on the X chromosome)成员,可特异性地在生殖系统中表达.RHOX5蛋白在胚胎发育、生殖组织的发育、精子的生成和成熟等多个环节发挥作用,但其功能的发挥途径尚不明确.在前期筛选与RHOX5蛋白相互作用的分子中初步获得一个BRPF1的新型转录本BRPF2.进一步构建pGBKT7-BRPF2质粒,酵母双杂交实验确定其与RHOX5蛋白的相互作用,GST-pull down实验确定其在体外的直接结合;PCR扩增BRPF1基因,构建pGBKT7-BRPF1和pGADT7-BRPF1质粒,酵母双杂交实验和GST-pull down实验证明RHOX5蛋白亦可以直接结合BRPF1蛋白.BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用证实暗示了BRPF2极有可能与BRPF1竞争性结合RHOX5蛋白,为三种蛋白功能的研究提供了新的思路. 相似文献
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