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均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系 总被引:6,自引:0,他引:6
采用均匀设计,对影响建兰ISSR-PCR体系的引物、Mg^2+、dNTP和Taq DNA聚合酶浓度等进行4因素5水平和4因素3水平两轮优化,建立了适合于建兰ISSR-PCR的反应体系:在20μL反应体系中,舍引物0.25μmol/L、Mg^2+ 2.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U和模板DNA40ng.在此基础上对扩增程序中的循环次数和退火温度,以及ISSR引物进行筛选.筛选获得的扩增程序为:94℃预变性5min;接着进行32个循环:94℃变性35S,52~56℃退火45S,72℃延伸90s;循环结束后,72℃延伸10min.同时筛选得到14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物. 相似文献
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