一株蟾毒灵转化菌株的筛选鉴定与转化条件优化

【背景】微生物转化是对天然产物进行结构修饰的重要手段,具有催化反应快、选择性强、反应条件易控制和污染小等特点。许多微生物能够对蟾毒配基类化合物进行生物转化,在不同位置进行结构修饰,并且产生毒性减弱的活性衍生物。【目的】筛选蟾毒灵生物转化菌株,以期发现活性更好、毒性降低的化合物。【方法】利用蟾毒灵为底物筛选其生物转化菌株,通过HPLC (High performance liquid chromatography)/LC-MS (Liquid chromatograph-mass spectrometer)鉴定转化产物;对可生物转化蟾毒灵的菌株进行菌落形态观察和分子生物学鉴定,并优化发酵条件提高转化率,同时测试该菌株对其他甾体化合物的转化作用。【结果】筛选获得一株蟾毒灵转化菌,经形态学与ITS (Internal transcribed spacer)分析鉴定为Naganishia属菌,转化产物为3-去氢蟾毒灵。该菌株生物转化的培养基最适底物浓度为8 mg/L,最适初始pH值为6.5,最佳接种量为3%,最佳转化时间为96 h,最终转化率为48.3%。该菌株可将雌酮E1转化为雌二醇E2,也可将雌二醇E2逆向转化为E1。【结论】首次发现Naganishia属菌株对甾体类化合物具有转化活性,其产生的弱细胞毒性的转化产物3-去氢蟾毒灵有望成为高效、安全的强心药物。微生物转化法选择性高、反应条件温和、操作简单,为大量制备活性化合物3-去氢蟾毒灵提供了一条简便易行的道路,也为更多甾体化合物结构修饰提供了可能。     

极地真菌Geomyces pannorum SA3-2-YM次级代谢产物的研究

采用聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析和高效液相HPLC等色谱技术,对极地真菌Geomyces pannorum SA3-2-YM的发酵液提取物进行分离纯化,共得到13个化合物,通过NMR和MS等波谱数据确定结构为:cyclo-(L-Trp-L-Pro)(1)、cyclo-(L-Trp-L-Tyr)(2)、cyclo-(Gly-L-Trp)(3)、cyclo-(L-Trp-L-Phe)(4)、cyclo-(L-Trp-L-Ser)(5)、cyclo-(L-Tyr-L-Pro)(6)、cyclo-(L-Trp-L-Ile)(7)、cyclo-(D-Ala-D-Trp)(8)、ergosterol(9)、(22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(10)、anicequol(11)、indazole(12)、p-hydroxybenzaldehyde(13)。其中,化合物1~9、11~13均为首次从地丝霉属的真菌中分离得到。抑菌试验表明化合物9对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有一定的抑制活性,其最小抑制浓度(MIC)均为90μg/mL。采用CCK-8法测试了13个化合物对四种肿瘤细胞株的体外细胞毒活性,化合物1~13对四株实验肿瘤细胞株表现出不同程度的抑制活性,其中环二肽化合物8对HeLa肿瘤细胞的抑制率可达62.28%,含有过氧基团的化合物10对SMMC-7721细胞的抑制率达到了68.13%。     

番红花侧芽中的新蒽醌化合物

从番红花（ＣｒｏｃｕｓｓａｔｉｖｕｓＬ．）侧芽的氯仿萃取部分分离到４个蒽醌类化合物（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）：Ⅰ和Ⅱ分别为大黄素和２羟基大黄素;Ⅲ和Ⅳ为两个新的蒽醌类化合物,分别为１甲基３甲氧基８羟基蒽醌２羧酸和１甲基３甲氧基６,８二羟基蒽醌２羧酸,通过光谱和化学方法确定了它们的化学结构。     

马氏钳蝎毒素中多肽BmK4112的分离纯化和一级结？…

对马氏钳蝎粗毒中多肽进行分离纯人级鉴定。应用凝胶过滤、离子交换和ＨＰＬＣ的反相色谱方法分离纯化样品。应用二疏基苏醇（ＤＴＴ）还原,碘乙酸保护法对纯化样品进行修饰,修饰样品经酶解后应用Ｅｄｒｎａｎ降解法,并结合ＥＳＩ－ＭＳ法和串联质谱法（ＭＳ－ＭＳ）分析肽的序列。比较修饰前后的质谱,测定分子中的二硫链数目。分离纯化工获得多肽ＢｍＫ４１１２,其一级结构为ＴＰＹＰＶ ＮＣＫＴＤ ＲＤＣＶＭ ＣＧＬＧＩ