SPC及EGFP共表达载体跟踪人羊水间充质干细胞体外定向分化

目的构建肺泡表面活性蛋白C(SPC)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体pcDNA3.1/SPC/EGFP,探讨其在体外跟踪人羊水间充质干细胞(AF-MSCs)定向分化为II型肺泡上皮细胞(AECII)的作用。方法采用PCR和DNA重组技术构建pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体,脂质体转染至AF-MSCs,G418稳定筛选;将AF-MSCs分为阴性对照组、未转染组和转染组,各组体外诱导培养后荧光显微镜观察SPC启动子调控下游EGFP基因表达活性,RT-PCR检测SPA和SPC mRNA表达水平,Western blot检测SPA和SPC蛋白表达以及电镜观察嗜锇性板层小体。结果成功构建pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体,测序结果与SPC启动子及EGFP序列一致;AF-MSCs体外诱导分化后,在阴性对照组中未见绿色荧光细胞,SPA和SPC mRNA及蛋白均为阴性表达,且未发现嗜锇性板层小体;在未转染组中亦未见绿色荧光细胞,而SPA和SPC mRNA(相对表达量为0.072±0.004和0.087±0.012)及蛋白(相对表达量为0.051±0.008和0.063±0.009)均为阳性表达,并发现嗜锇性板层小体;在转染组中可见绿色荧光细胞,SPA和SPC mRNA(相对表达量为0.109±0.011和0.126±0.017)及蛋白(相对表达量为0.075±0.012和0.081±0.006)均为显著表达,与未转染组相比差异均有统计学意义(t值分别为-5.50、-3.16、-2.90和-2.85,均P0.05),亦可见嗜锇性板层小体。结论经pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体转染的AFMSCs在体外适当诱导下能定向分化为AECII,pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体可能成为跟踪AF-MSCs定向分化的工具,为肺组织再生的干细胞治疗提供研究基础。     

肺普通裂褶菌感染并肺不张1例并文献复习

普通裂褶菌(Schizophyllum commune,S.commune)是一种丝状真菌,为条件致病菌,引起人深部侵袭性感染国内报道罕见。我院收治了1例免疫功能正常患者肺部感染S.commune,广东人,既往体健,临床表现为反复出现的非刺激性咳嗽、咳黄白色黏液痰,胸部CT示右肺上叶肺不张并黏液栓,纤支镜下可见右肺上叶黏液栓堵塞及大量黄色脓性分泌物,肺泡灌洗液培养出S.commune,给予伊曲康唑抗真菌治疗1周后症状好转出院,出院后继续服用伊曲康唑3个月,随访复查胸部CT示病灶吸收,右肺上叶完全复张,提示抗真菌治疗有效。     

靶向ADAM17基因RNA干扰慢病毒载体的构建及慢病毒包装

目的构建靶向ADAM17基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体及包装慢病毒。方法根据人ADAM17mRNA序列设计4个靶序列,合成4对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上5对寡核苷酸序列退火后连入pLVTHM质粒,经酶切和测序鉴定。将重组慢病毒质粒转染至A549细胞,以Real-time PCR检测A549细胞中ADAM17 mRNA表达。将干扰效果最佳的质粒载体和包装质粒共转染至293T细胞,包装产生病毒颗粒。以流式细胞术检测重组慢病毒的滴度。结果酶切和测序证实干扰靶序列已被准确克隆到pLVTHM质粒载体。pLVTHM-ADAM17-siRNA1-4均可显著抑制A549细胞ADAM17 mRNA的表达,其中pLVTHM-ADAM17-siRNA4的抑制效果最佳。LV-ADAM17-siRNA4重组慢病毒的滴度为2.16×108TU/ml。结论成功构建了靶向人ADAM17基因RNAi慢病毒载体及包装了重组慢病毒。     

亚心形扁藻多糖的提取分离纯化及组成研究

以实验室培养的亚心型扁藻为原料,热水提取扁藻多糖。多糖经加热除蛋白、乙醇分级、Sephadex G-50柱层析等一系列纯化步骤后,得到一扁藻多糖(简称PPSc-1)。PPSc-1经醋酸纤维素薄膜电泳和SephadexG-100柱层析的纯度鉴定,组分均一。将多糖PPSc-1用三氟乙酸全水解,然后进行HPAEC-PAD分析,结果表明组成该多糖的单糖为D-半乳糖、D-2-氨基葡萄糖、D-阿拉伯糖、D-鼠李糖和3种未知单糖。各种已知单糖的摩尔比是D-半乳糖∶D-2-氨基葡萄糖∶D-阿拉伯糖∶D-鼠李糖=59.64∶40.9∶18∶1。