小鼠免疫抑制蛋白SOCS3脯氨酸富集区为其生物学功能所必需

SOCS3（suppressors of cytokine signaling 3）可以调节信号转导过程并影响造血干细胞的分化.利用生物信息学方法,发现SOCS3蛋白含有脯氨酸富集区,采用重组PCR技术缺失SOCS3蛋白中的129～161位的氨基酸（SOCS3Δ129-161）,并将其克隆到pcDNA31/V5质粒载体中.转染细胞,然后通过流式细胞技术,分析预测的功能区对SOCS3蛋白功能的影响.结果表明,此脯氨酸富集区对SOCS3蛋白的三级结构和功能有重要的意义.建模结果显示,SOCS3Δ129-161蛋白结构发生显著变化.脯氨酸富集区的缺失也影响小鼠骨髓细胞向CD8+T细胞分化.研究结果显示,SOCS3蛋白中129～161位的脯氨酸富集区在其结构和功能上有重要的作用.     

血清SF、AMH、APN、NF-κB与肥胖型多囊卵巢综合征不孕患者胰岛素抵抗和IVF-ET助孕妊娠结局的关系研究

摘要 目的：探讨血清铁蛋白（SF）、抗苗勒管激素（AMH）、脂联素（APN）、核因子-κB（NF-κB）与肥胖型多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者胰岛素抵抗（IR）和体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕妊娠结局的关系。方法：选取2019年1月～2021年1月广西医科大学第一附属医院收治的120例PCOS不孕症患者,根据体重指数（BMI）分为肥胖组（BMI≥28 kg/m²,79例）和非肥胖组（BMI＜28 kg/m²,41例）,肥胖组患者根据IVF-ET妊娠结局分为妊娠失败组47例和妊娠成功组32例。酶联免疫吸附法检测血清AMH、APN、NF-κB、SF水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,采用Pearson相关系数分析肥胖型PCOS不孕症患者血清AMH、APN、NF-κB、SF水平与HOMA-IR的相关性,采用多因素Logistic回归分析IVF-ET助孕妊娠结局的影响因素。结果：肥胖组血清AMH、NF-κB、SF水平和HOMA-IR高于非肥胖组,APN水平低于非肥胖组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,肥胖型PCOS不孕症患者的HOMA-IR与血清AMH、NF-κB、SF水平呈正相关（r=0.663、0.734、0.687,均P＜0.05）,与APN水平呈负相关（r=-0.683,P＜0.05）。妊娠失败组黄体生成素（LH）、LH/促卵泡生成素（FSH）比值、HOMA-IR、血清AMH、NF-κB、SF水平均高于妊娠成功组,受精率、优胚率、FSH、APN水平均低于妊娠成功组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,LH、LH/FSH、HOMA-IR、SF、AMH、NF-κB水平升高是肥胖型PCOS不孕症患者IVF-ET妊娠失败的危险因素,APN水平升高是IVF-ET妊娠失败的保护因素（P＜0.05）。结论：肥胖型PCOS不孕症患者血清AMH、NF-κB、SF水平升高,APN水平降低,且与IR和IVF-ET助孕妊娠结局有关。     

MyD88aa155-171功能区缺失对免疫相关细胞共刺激分子和细胞因子表达的影响

利用重组PCR的方法,克隆并构建MyD88和MyD88aa155-171功能区缺失（MyD88?155-171）载体,转染免疫相关细胞并筛选获得稳定细胞系。报告基因实验结果显示MyD88?155-171功能区缺失能够抑制转录因子NF-κB和AP-1的活性,在不同Toll样受体（TLR）配体刺激后,转染MyD88?155-171的细胞表面分子的表达低于MyD88正常表达的细胞,并且抑制表面分子CD86和B7H1在TLR配体刺激后的上调。同时,多细胞因子分析系统的检测结果表明,给予TLR配体刺激之后,MyD88-/-树突细胞表达低水平的细胞因子,转染MyD88可以使细胞因子表达明显增加,而仅表达MyD88?155-171可以明显影响IL-12,IFN- 的表达。以上结果表明MyD88功能区缺失影响免疫相关细胞表面分子和细胞因子的表达及Toll 样受体信号的传递,其在细胞内信号系统的具体作用机制还需进一步证实。     

.限制性siRNA干涉文库的构建以及影响HeLa细胞增殖新功能基因的扫描

利用RNA干涉文库进行大规模高通量的功能基因扫描,已成为发现新功能基因的重要方式和手段．为了寻找在细胞增殖和分化过程中的新功能基因,根据斯坦福大学公布的与人类胚胎干细胞和造血干细胞增殖和分化过程中有关基因的基因芯片的分析结果,组建了与细胞增殖和分化有关的RNA限制性干涉文库．该文库包括靶向各类基因的载体,如包括转录因子、各类蛋白激酶、细胞周期调控蛋白以及一些未知功能基因在内的225个基因．利用这个限制性RNA干涉文库对控制HeLa细胞增殖的基因进行筛选．并通过WST-1高通量检测,发现了2个同HeLa细胞增殖相关的基因：CNKSR3(Homo sapiens CNKSR family member 3)和Fosl2 Homo sapiens FOS like antigen 2),并初步证实：沉默CNKSR3会促进HeLa细胞的增殖,而沉默Fosl2则抑制HeLa细胞的增殖功能．