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作为小GTP酶Arf6的鸟甘酸交换因子(GEF),人EFA6A蛋白主要包含PH和Sec7两个结构域,Sec7是行使GEF功能的核心区域。通过分析Jpred、Uniprot等生物信息学软件的预测结果,从全长1 024 aa中选取的重组Sec7结构域的边界为506-719,共214 aa。以人脑cDNA文库为模板,通过优化PCR程序成功扩增出Sec7基因,经NdeI和XhoI双酶切后亚克隆至原核表达载体p28a中,成功构建p28-Sec7重组子,测序结果与NCBI中公布的序列100%吻合。将重组质粒p28-Sec7转化至BL21-Gold(DE3)宿主菌中,终浓度0.3 mmol/L IPTG、16℃、24 h诱导表达,重组蛋白经过Ni柱和分子筛两步纯化。试验结果显示,重组Sec7成功表达,性质均一,纯度高于95%,表达量为70 mg/L。 相似文献
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贡菊黄酮抗小鼠急性肝损伤作用的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究黄山贡菊中黄酮的提取纯化方法及其抗小鼠急性肝损伤作用,采用乙醇回流法从黄山贡菊中提取粗黄酮,聚酰胺柱层析纯化,真空冷冻干燥获得黄酮粉末。对以四氯化碳造模的急性肝损伤小鼠分别给予联苯双酯及不同剂量的贡菊黄酮灌胃,测定血清中GPT/ALT、GOT/AST活性,测定肝组织中SOD活性和丙二醛含量,HE染色观察肝组织病理形态学的改变。结果表明,黄山贡菊黄酮可以降低急性肝损伤小鼠血清中GPT/ALT、GOT/AST活性,提高肝组织的SOD活性,降低丙二醛含量,对减轻肝脏病理组织损伤有积极作用。 相似文献
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