抗HIV-1重组导向毒素SL120在毕赤酵母中的表达及其活性检测

以pPIC9K为载体,构建抗HIV 1gp12 0单链抗体scFv12 0与葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA ,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Muts型多拷贝整合菌,甲醇诱导培养可分泌表达5 7kD的预期大小蛋白—重组导向毒素SL120 ,表达量达50.1mg/L。通过单链抗体亲和力测定,表明蛋白SEA和scFv120的构象有微弱的相互影响,但此重组导向毒素仍可高效介导CTLs杀伤HIV-1靶细胞。     

VEGF和IGF-I在子宫内膜异位症患者血清中的表达及临床意义

目的：探究血管内皮生长因子（VEGF）和胰岛素样生长因子-I（IGF-I）在子宫内膜异位症患者血清中的表达及临床意义,为 子宫内膜异位症的治疗提供参考。方法：选取我院2015 年1 月至2016 年1 月收治的子宫内膜异位症患者50 例为实验组,另选 体检中心健康妇女50 例为对照组。实验组患者根据疾病不同分期分为I、II期（n=24）和III、IV 期（n=26）。通过酶联免疫吸附法 （ELISA）检测两组对象血清中VEGF和IGF-I的水平,采用Pearson相关分析法分析实验组患者血清中VEGF 和IGF-I 表达的相 关性。结果：实验组患者血清中VEGF和IGF-I的水平均明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;实验组III、IV期患者血清 中VEGF和IGF-I的水平明显高于I、II期患者,差异有统计学意义（P<0.05）;Pearson 相关性分析显示实验组患者血清中VEGF 和IGF-I的水平变化呈正相关关系（r=0.507,P<0.05）。结论：子宫内膜异位症患者血清中VEGF和IGF-I的水平高于正常水平,并 随着病情的加重而不断升高,且二者呈正相关关系,可协同作用加快病情发展。     

禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达

利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-H5HA、GS115/pPIC9K-H7HA及GS115/pPIC9K-H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。