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目的:细胞S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein,Skp2)作为泛素化降解过程中的一种F-box蛋白,在泛素化降解中起着特异性的底物识别和关键性的速率限制作用.依赖Skp2的泛素化降解途径参与p27、p21等众多细胞周期调控因子的降解,进而通过影响G1-S检测点而调控细胞周期.本研究探讨靶向干扰人结肠癌HCT116细胞中Skp2基因对细胞p27表达的影响及细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的变化.方法:将已合成好的特异性的Skp2RNA干扰载体转染人结肠癌HCT116细胞,G418稳定筛选后,通过RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞内p27mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对5-Fu敏感性的变化.结果:在转染干扰载体后,HCT116细胞内的p27mRNA表达无明显变化,蛋白水平却明显上升.MTT显示HCT116细胞对5-FU敏感性较其他组显著提高,IC50值明显下降(P＜0.05).结论:Skp2基因的RNA干扰能够上调结肠癌细胞内源性p27蛋白的表达,并提高5-FU对癌细胞的杀伤作用,为大肠癌的基因治疗提供了新的思路. 相似文献
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