人参多肽基因的酶法体外随机——定位诱变

本文报道了酶法体外随机——定位诱变人参多肽基因的原理和方法。该法把传统的随机诱变和现代的定位诱变融合起来,可灵活控制基因突变的随机性和定位性。我们用双脱氧末端终止法测定了三个突变株的结果证实了该法的合理性和可行性,     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ突变体的结构与稳定性研究

报道了用定位诱变技术，改变无色杆蛋白酶Ⅰ的酶原加工位点，使其向左或向右移动，导致突变体成熟酶的肽链从Ｎ端延长或缩短若干氨基酸残基。所获突变体显示了低于野生酶的活性。突变体的园二色谱和荧光光说研究表明，它们的结构发生了某些微小的改变。在不同的ＰＨ值的，温度和不同浓度的ＳＤＳ和盐酸胍条件下，也表现了低于天然酶的稳定性。     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究

无色杆菌蛋白酶Ⅰ是高度专一于赖氨酸的丝氨酸蛋白酶,比较其它典型同类蛋白酶的一级结构,该酶的成熟体肽链在Ｎ端和Ｃ端分别长出９个和２６个氨基酸残基。在其Ｎ端设计和构建一些突变体。它们分别具有缩短或延长的Ｎ端。这此突变体低于天然酶的活性和稳定性的结果揭示,Ｎ端这部分延长在稳定该酶的活性构象方面起着重要作用。     

海藻糖的生物合成和相关酶的特性

海藻糖［‘］（tlehalose）是一种由两个葡萄糖分子通过a,a—l,l糖昔键连接成的非还原性二糖。海藻糖广泛分布于微生物、植物、动物体内,其含量随生物所处生活环境而变化,是一种典型的代谢应激物。海藻糖不仅可以作为碳源和能源,而且还具有保存生物活力的特殊功能,使生物在许多不利情况（高温、脱水、冷冻等）下,维持细胞膜和蛋白质的稳定,由此可以使食品保鲜,可防止由白蛋白导致的疫苗血源污染,若取代白蛋白,应用于各类疫苗、诊断用品、各种酶、蛋白质、细胞因子、干扰素等,于室温保存数年不失效,并且其价格低廉,故具有应用…     

α－天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收

建了α－天冬氨酰二肽酶基因(pepE)与载体pBV220连接的高表达重组质粒(pBVPEP,4337bp)。转化大肠杆菌后,目的基因表达为两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白(～75％)和包含体蛋白,共占细菌总蛋白的30％左右。SDS－PAGE分析温敏诱导的表达蛋白,可以观察到约27kDa的高表达蛋白条带,与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法,回收了包含体中95％以上的表达蛋白。     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ突变体的结构与稳定性研究

报道了用定住诱变技术,改变无色杆菌蛋白酶Ⅰ的酶原加工位点,使其向左或向右移动,导致突变体成熟酶的肽链从N端延长或缩短若干氨基酸残基．所获突变体显示了低于野生酶的活性．突变体的园二色谱和荧光光谱研究表明,它们的结构发生了某些微小的改变．在不同的pH值、温度和不同浓度的SDS和盐酸胍条件下,也表现了低于天然酶的稳定性．在N端延长的突变体中,酶原加工位点越远离天然加工位点的突变体,显示了越低的活性和稳定性．缩短的突变体活性和稳定性最低．这些结果表明,天然成熟酶的N端可能比较靠近酶的活性中心,并参与构成活性中心附近的局部构象由此可见N端区在成熟酶的结构与功能方面的重要作用．     

胶样菌CB39产海藻糖的研究

从长白山天池水中筛选到一株低温条件下产糖的细菌。通过薄层层析、成脎反应、毛细管等速电泳以及红外光谱法确定该糖为海藻糖;经鉴定此菌株是胶样菌属中的一个新种(ColloidesSp.)定名为CB39;与已报道的产海藻糖菌株不同的是,菌株CB39能将产生的海藻糖分泌到细胞外,18℃时其培养液中海藻糖含量为2562mg/g干菌体;采用紫外诱变法筛选到一株在25℃条件下产海藻糖量为4167mg/g干菌体的高产突变株5,产糖量是同温度下野生菌的8倍。     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究

无色杆菌蛋白酶Ⅰ（AchromobacterproteaseⅠ,APⅠ）是高度专一于赖氨酸的丝氨酸蛋白酶．比较其它典型同类蛋白酶的一级结构,该酶的成熟体肽键在N端和C端分别长出9个和26个氨基酸践基．在其N端设计和构建了一些突变体,它们分别具有缩短或延长的N端．这些突变体低于天然酶的活性和稳定性的结果揭示,N端这部分延长在稳定该酶的活性构象方面起着重要作用．