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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA克隆片段。采用两种方式构建成真核表达质粒。第一:切除t-PA3＇端非编码区序列后插入SR启动子和SV_(40)晚期Poly(A)终止信号之间,形成pMGZ6001质粒;第二:将3＇端部分切除并带有Poly(A)加尾信号的t-PA片段插入由金属硫蛋白MT启动子调控的载体中,分别组建成含大T抗原与不含大T抗原的两个表达质粒pMGZ6002和pMGZ6003。这三种质粒用磷酸钙共沉淀法和电穿孔法转染CHO-dhfr细胞,阳性克隆细胞均能合成并分泌rt-PA。其分子量约68kD,并能与t-PA单克隆抗体特异结合,溶解纤维蛋白。阳性克隆经MTX选择培养扩增基因,培液中rt-PA表达水平可达3000IU/(10~6细胞·48h)。 相似文献
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蛋白质工程是应用寡核苷酸定点突变的技术来修饰DNA,最早由Smith及其同事建立于70年代末。蛋白质技术应用非常广泛,如改变蛋白质的生物活性、特异性、稳定性等。对蛋白质稳定性的研究内容很丰富,采用的途径也较多,本文就二硫键在蛋白质稳定性方面的作用作一综述。 相似文献
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