中药桑寄生(Lorathlorace)抗肿瘤毒蛋白的分离及部分性质初步研究

用Sephadex G100分子筛法分离中药桑寄生中蛋白质,得到大分子量组分a和小分子量组分b;用CM-Sepharose Fast Flow分离桑寄生的大分子物质,得到四个部分:组分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ。对以上各组分蛋白及其分子量用SDS-PAGE电泳确认;选用肝癌细胞Bel-7402,经MTT染色法检测了其抗肿瘤活性。初步得出实验结果:在我国中药桑寄生中分离到的组分Ⅱ(包含两种蛋白或亚基),分子量在31000和33000左右,具有抑制肝肿瘤细胞Bel-7402生长作用;组分Ⅲ中分子量在21000左右的蛋白抗肝肿瘤细胞Bel-7402作用不明显;组分Ⅳ中分子量小于14000的蛋白没有抗肿瘤作用,分子量为36000的蛋白的抗肿瘤作用有待进一步试验确定。     

丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog(MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件;采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明:(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)2,4-D;诱导茎较快产生愈伤的是MS+0.1mg·L~(-1)NAA+0.5 mg·L~(-1)6-BA;1 mg·L~(-1)反式玉米素(ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织;1.0 mg·L~(-1)2,4-D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg·L~(-1)筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60%;而用10 mg·L~(-1)链霉素筛选阳性率达70%。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg·L~(-1)链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。