大鼠肾脏和其它组织中磷酸酪氨酸蛋白的研究

本文采用P-tyr-BSA为免疫原免疫家无得抗血清。将纯化的IgG与HRP偶联,建立了P-tyr-Pr的ELISA法,并测定了正常大鼠肾脏等组织中P-tyr-Pr含量,其分布规律如下:上清中P-tyr-Pr含量高者,其颗粒部分则低,反之亦然;其中肾脏上清中含量远比其它组织(脾、肺、肝等)高。在此基础上,又研究了膜性肾炎大鼠肾脏P-tyr-Pr含量,发现其上清中的含量远远高于正常大鼠肾脏中的含量。     

两种酪氨酸蛋白激酶活性在主动脉平滑肌细胞增殖周期中的动态变化

本文以人工合成的多肽PGAT 为底物鉴定了培养的家兔ASMC 膜性TPK。发现Mg~(2+)和Mn~(2+)对ASMC 胞浆膜性TPK 和核膜性TPK 的激活作用有两点不同:(1)它们对前者的最适激活浓度高于后者;(2)对胞浆膜性TPK,Mn~(2+)最大激活效应大于Mg~(2+)而对核膜性TPK,Mn~(2+)则低于Mg~(2+)。这两种TPK活性在其G_1期的变化特点是:胞浆膜性TPK最高活性出现在G_1晚期(9 h),核膜性TPK最高活性则出现在G_1早期(3 h)。     

酪氨酸蛋白激酶底物的 ELISA 测定及应用

用合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白(P-tyr-BSA)免疫家兔得抗血清,此抗血清与3种磷蛋白均有交叉反应.将 IgG 纯化并与辣根过氧化物酶偶联,经 Sephadex G-200纯化得酶标结合物.纯化的 IgG 只与载体牛血清白蛋白和磷酸酪氨酸蛋白有交叉反应.ELISA (酶联免疫吸附测定法)的最小检出量为2—4ng,与被检磷酸酪氨酸蛋白均有交叉反应,但与磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸蛋白及其他含磷酸物质无交叉反应.样品变异系数,批间和批内均小于5%.血清磷酸酪氨酸蛋白检测结果:20例正常人均阴性,20例急性淋巴细胞性白血病18例阳性,14例非急性淋巴细胞性白血病均阳性.     

主动脉平滑肌细胞增殖周期中磷酸酪氨酸蛋白的研究

以人工合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,得到抗TPK 天然磷酸化底物(P-tyr-Pr)的特异性抗体。P-tyr-Pr ELISA测定结果显示:ASMC 胞浆和核内颗粒部分P-tyr-Pr 的最高含量均出现于G_1晚期(9 h),且核内P-tyr-Pr 的含量远高于胞浆。免疫组织化学显示:ASMC 中P-tyr-Pr 的总量也以G_1晚期为最高,在G_1晚期ASMC 中,P-tyr-Pr 主要分布于细胞核及其周围的胞浆中。