利用CRISPR/Cas9系统检测果蝇细胞中组蛋白甲基化修饰对20E信号传导的调控

【目的】利用CRISPR/Cas9基因敲除系统在黑腹果蝇Drosophila melanogaster细胞中筛选并检测组蛋白甲基化修饰对蜕皮激素20 羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone, 20E)信号传导的调控。【方法】通过Flybase网站分析并总结黑腹果蝇组蛋白甲基转移酶及其修饰位点;将5个组蛋白甲基转移酶基因［trr, Mes-4, ash1, Su(var)3-9和egg］的sgRNA插入到敲除载体pAc-sgRNA-Cas9骨架中并转染黑腹果蝇Kc细胞,利用TA克隆和测序鉴定突变位点。以Trr正调控20E初级应答基因Br-C的转录表达为阳性对照,利用qRT-PCR和Western blot检测该系统敲除靶基因的有效性;通过检测20E应答元件(20E response element, EcRE)双荧光素酶活性确定trr, Mes-4, ash1, Su(var)3-9和egg是否参与20E信号传导。【结果】果蝇组蛋白甲基化修饰主要发生在组蛋白H3的赖氨酸残基上,H3的精氨酸残基和组蛋白H4的甲基化修饰较少。trr敲除载体pAc-trr-sgRNA-Cas9转染Kc细胞后成功突变trr,降低H3K4三甲基化水平并阻断20E对其初级应答基因Br-C的转录诱导,证明该敲除系统的有效性。除trr之外,Mes-4和egg的敲除降低EcRE的双荧光素酶活性。【结论】插入靶标基因sgRNA序列的pAc-sgRNA-Cas9敲除载体在果蝇Kc细胞中可以有效快捷地突变靶基因。利用该敲除系统发现,除Trr之外,Mes-4和egg影响EcRE的活性而参与20E信号传导。本研究为昆虫细胞CRISPR/Cas9介导的基因敲除和组蛋白甲基化修饰调控20E信号传导的深入研究提供了理论依据与工作基础。     

白鹭消毒水器的功能及应用

白鹭消毒水器是哈慈股份有限公司最新推出的具有广谱杀菌功效的专利产品。经该产品制取的消毒液是一种含氯消毒剂,它具有杀菌谱广、高效、安全的特点,能有效杀灭细菌繁殖体、结核杆菌、真菌、病毒、阿米巴包囊和藻类,在医用消毒、公共卫生、餐饮及家用等方面有广泛的应用。     

哈慈五行针对家兔血清中SOD、GSH-PX、CAT活力及自由基代谢的影响

世界医学界公认:自由基是人体衰老的主要因素,而抗衰老的主要途径是依靠超氧化物歧化酶(又称SOD)清除自由基。本文采用哈慈五行针双极透针法,对家兔血清中SOD酶活性及自由基代谢的试验证明SOD酶活性提高达28.6%。用哈慈五行针双极透针法N、S极针在人体二侧(如任督二脉透针法和心脑增氧术的腕踝透针法),形成垂直切割磁场,作用经穴、体液,激活SOD酶的活性,提高人体自身抗自由基能力,因而具有一定的抗衰老功能。     

哈慈五行针对家兔血液流变学的影响

应用哈慈五行针双极针法作用于大白兔经穴、体液8周后,由颈动脉取血,测试其血液流变学特征,并与对照组作比较;全血还原粘度五行针实验组为3.58,对照组为4.06。证明五行针对红细胞的聚集起到了解聚作用,增强了红细胞的流动性,即在五行针的磁场作用下,红细胞表面电荷在洛仑兹力的作用下朝磁场和血液流动相垂直方向运动,红细胞的电泳速度加快,红细胞间相互排斥性增加,粘滞度下降,流动性提高。哈慈五行针对于临床改善血液的流变性、降低血液粘度、促进血液循环,具有实际意义。用于冠心病、高血压、脑血栓等循环系统疾病的预防和治疗。     

印迹基因修饰使孤雌胚胎干细胞获得四倍体补偿能力

孤雌胚胎干细胞(Parthenogenetic embryonic stem cells,pESCs)的遗传物质全部来源于母源基因组,因缺失父源基因而不具备四倍体补偿的能力。为了使pESCs也具备发育到个体的能力,呈现与受精卵来源ESCs类似的多能性,文中借助CRISPR/Cas9系统对孤雌来源的pESCs中的2个重要母源印迹基因的差异甲基化区域(Differentially methylated region,DMR)进行单等位基因敲除(H19-DMR,IG-DMR),获得双基因敲除的(DKO)pESCs。结果表明,pESCs虽然来源于母源基因组,但是其形态特征、多能干性标记分子的表达水平、体外神经分化能力与受精卵来源的ESCs基本一致。最后,通过基因修饰的DKOpESCs可以通过四倍体补偿获得发育到期的胎儿,表明经过印迹基因修饰的pESCs也具有发育到一个完整个体的多能性。从而为再生医学研究提供了一类具有主要组织相容性复合基因匹配且多能性良好的资源细胞。     

白鹭消毒水器的功能及应用

白鹭消毒水器是哈慈股份有限公司最新推出的具有广谱杀菌功效的专利产品。经该产品制取的消毒液是一种含氯消毒剂,它具有杀菌谱广、高效、安全的特点,能有效杀灭细菌繁殖体、结核杆菌、真菌、病毒、阿米巴包囊和藻类,在医用消毒、公共卫生、餐饮及家用等方面有广泛的应用。     

磁处理水对小鼠血清SOD及LPO水平影响的实验研究

用磁处理水喂养小白鼠30天,测定其血清超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化脂质(LPO)水平。结果表明:饮用磁处理水的小白鼠血清超氧化物歧化酶含量明显高于对照组(饮用普通自来水),P<0.02;而血清过氧化脂质水平明显低于对照组P<0.01。这一结果提示我们,磁处理水确能降低生物机体自由基水平,提高机体抗氧化酶活性。     

全子宫切除术前磁化水阴道冲洗临床效果观察

磁化水治疗组100例中99例断端创口愈合良好,1例并发息肉。正常愈合率为99%,对照组60例中54例愈合,5例愈合欠佳,1例并发盆腔炎,正常愈合率为84%,治疗组的疗效好于对照组。证明:磁化水术前阴道冲洗,可促进术后阴道创口愈合、降低感染率。     

哈慈五行针对飞行人员甲皱微循环影响的实验

空军兴城疗养院对226名健康飞行人员分成二组进行甲皱微循环试验,将哈慈五行针针在内关、外关、曲泽、足三里穴,对照组在相同穴位贴稀土永磁片。实验29天结果显示:哈慈五行针可使健康飞行人员微血管扩张、血流加快、红细胞粘集减少,微循环明显改善,贴磁片组也有改善,但不明显。按两组改善值比较,五行针组管径输出枝增大3.05,血液流速增加0.398,红细胞粘集减少20,而磁片组管径输出枝增大2.57,血液流速增加0.196,红细胞粘集减少到3。试验证明,哈慈五行针继承经穴理论,疗效显著,优于磁片。