高亲和力抗乙型肝炎病毒PreS1的人源单链抗体的获得：天然及免疫抗体库的对比研究(英)

以健康人的外周血淋巴细胞为来源,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫.分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA,扩增抗体基因,构建大容量天然单链抗体（scFv）噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库.以PreS1肽进行3轮淘选后,抗原抗体反应结果显示,从免疫库中获得了亲和力10^-7～10^-8 M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体,高于天然库的结果（10^-6～10^-7 M）.测序结果表明两株抗体均为人抗体.为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础.同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库.     

高亲和力抗乙型肝炎病毒PreS1的人源单链抗体的获得:天然及免疫抗体库的对比研究( 英文)

以健康人的外周血淋巴细胞为来源 ,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫 .分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA ,扩增抗体基因 ,构建大容量天然单链抗体 (scFv)噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库 .以PreS1肽进行 3轮淘选后 ,抗原抗体反应结果显示 ,从免疫库中获得了亲和力 10 -7～ 10 -8M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体 ,高于天然库的结果 (10 -6～ 10 -7M ) .测序结果表明两株抗体均为人抗体 .为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础 .同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库 .     

线性短模体：介导蛋白质相互作用的新模块

线性短模体是天然无序蛋白实现生物学功能的重要组件.线性短模体具有柔性结构和短小的序列,可以介导瞬时、可逆的蛋白质相互作用,并在发生相互作用时表现出杂泛性.随着实验技术的更新和预测手段的发展,越来越多的线性短模体被发现和重新定义,例如BH3线性短模体.本文重点总结了线性短模体在结构、生物学功能以及进化等方面的特点.对线性短模体功能的研究将为解析细胞信号转导网络、疾病靶标确认、新药发现等领域带来新的思路.     

不同来源肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应的对比

目的:通过对比不同来源的人肝癌细胞系HepG2和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应,指导两种肝细胞在体外降脂药物评价中的实际应用。方法:用游离脂肪酸(油酸/棕榈酸,2:1)诱导HepG2细胞、原代大鼠肝细胞脂肪变性,并用100μmol·L-1苯扎贝特干预,检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、活性氧(ROS)含量,细胞内脂滴数目、并检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:FFA刺激使HepG2细胞和原代大鼠肝细胞脂质沉积(TG、脂滴)和氧化应激(ROS、MDA、SOD)水平上升。苯扎贝特对HepG2细胞1 mmol·L-1FFA造模组和原代大鼠肝细胞0.5 mmol·L-1FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平改善显著;而HepG2细胞0.5 mmol·L-1FFA造模组和原代大鼠肝细胞1 mmol·L-1FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平在苯扎贝特干预后变化不明显。结论:在相同FFA造模浓度,原代大鼠肝细胞病理特征变化更为明显;苯扎贝特对两种肝细胞在脂质沉积和氧化应激水平的作用也不完全相同。因而HepG2细胞和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应是不完全相同的。     

腹泻柴达木马亚成体粪便微生物多样性分析及其生物标记物的筛选

为比较青藏高原柴达木马亚成体腹泻与健康个体粪便微生物群落多样性和结构组成的差异, 我们利用16S rRNA测序技术对采集的腹泻 (n = 3) 和健康 (n = 13) 个体粪便样本细菌的组成与分布进行分析比较,并利用实时荧光定量PCR测定相关菌属的含量。结果显示,无论健康还是腹泻,厚壁菌门、拟杆菌门、疣微菌门、变形杆菌门和螺旋体门是柴达木马亚成体粪便中的优势菌门。相比健康组,腹泻组粪便微生物的Alpha多样性显著下降 (P < 0.05),厚壁菌门相对丰度下降而变形杆菌门的相对丰度显著增加 (P < 0.05),推断这两个门中的梭菌属、普雷沃菌属、纤杆菌属等丰度的失衡可能是导致柴达木马腹泻的原因之一。此外,通过机器学习的随机森林算法筛选出12个对健康和腹泻柴达木马亚成体粪便微生物差异具有较大影响的特征菌属,包括甲烷短杆菌属、纤杆菌属、Paludibacter、肉食杆菌属和迷踪菌属等。研究揭示了健康和腹泻柴达木马亚成体粪便微生物组的变化,为进一步研究青藏高原地区家畜腹泻提供一定的数据支持。     

黄芩素抑制人巨细胞病毒感染星形胶质细胞的实验研究

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法检测BAI组、HCMV组、HCMV+BAI组和对照组细胞的细胞活性,观察BAI对HCMV感染致人星形胶质细胞增殖异常的抑制作用;Real-time PCR检测不同组之间IE、pp65 mRNA表达的变化;免疫荧光、Western blot技术检测IE、pp65蛋白表达的变化。MTT结果显示,20μmol/L BAI+HCMV组的吸光值在24、48、72 h均高于HCMV组(P0.05);形态学观察病毒感染48 h时,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),而20μmol/L BAI+HCMV组细胞状态较好,CPE不明显;Real-time PCR结果显示在感染48和72 h时20μmol/L BAI+HCMV组IE、pp65的mRNA表达明显低于HCMV组(P0.05);免疫荧光、Western blot结果显示20μmol/L BAI+HCMV组细胞的IE、pp65蛋白表达明显低于HCMV组(P0.05)。以上结果显示,适当浓度的黄芩素能抑制HCMV感染所致的细胞增殖异常,同时降低IE及pp65的mRNA和蛋白表达量。     

小肽多拷贝基因表达载体的构建及其高效表达(英文)

介绍一种快速、高效构建小肽多拷贝基因表达载体的策略 ,并构建了相应的表达载体pETE coT .用人工合成的编码 2 8个氨基酸残基的胸腺素α1基因为模型 ,采用限制酶EcoT14I识别序列CCAAGG为小肽基因两末端序列 ,利用其酶切后可产生非镜相对称粘性末端 ,一次连接反应就构建出一系列不同基因拷贝数的表达载体 ;在小肽基因两端分别引进编码FactorXa和羟胺蛋白切割位点的序列 ,表达出的融合蛋白可被FactorXa和羟胺剪切出不残留任何外源氨基酸的小肽 .不同拷贝数的小肽融合蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中均获得高效表达 .     

一个全新的有机小分子Bcl-2蛋白抑制剂

一种全新结构的芳香杂环化合物8-氧-8H-苊并[1,2-b]-9-腈(S1, MW: 341)被证明在动物体内和体外均具有以剂量依赖方式诱导肿瘤细胞凋亡的能力. 10 μmol/L S1诱导小鼠肝癌细胞株H22细胞发生凋亡的比例高于对照组10倍. 0.3 mg/kg体重S1处理的皮下荷瘤小鼠的肿瘤组织切片中, 凋亡细胞的比例高于对照组3倍. 通过分子机制研究, 表明S1通过特异性下调Bcl-2蛋白的表达水平, 启动下游凋亡因子的级联反应: H22细胞与10 μmol/L S1共培养2 h后, Western blot结果显示细胞内Bcl-2蛋白的活性降低; 4 h后, 罗丹明123染色显示细胞线粒体膜去极化, 同时酶联免疫检测结果表明caspase9活化; 6 h之后caspase3活化. caspase8的表达在S1胁迫培养24 h内未见变化. 荧光定量PCR检测H22细胞在10 μmol/L S1胁迫下24 h内, Bcl-2 mRNA表达水平没有明显变化. 圆二色光谱分析S1与Bcl-2蛋白的结合, 也证实S1破坏了Bcl-2蛋白的α-螺旋结构. S1对H22细胞、人乳腺癌细胞MCF-7和高表达Bcl-2蛋白的转基因HL60细胞的IC₅₀分别低至0.17, 0.09和2.8 μmol/L. S1作为一个全新结构的Bcl-2蛋白抑制剂, 为具有自主知识产权抗肿瘤药物的研究提供了一个有价值的先导化合物.     

斑(鱼祭)人工繁殖与鱼苗培育的初步试验

斑(鱼祭)Clupanodon punctaus(Temminck ＆ Schlegl)是我国近海习见经济鱼类之一。因为它具有生长快、肉味鲜美、以浮游生物为食等特点,适宜与对虾Penaeus orientalis Kishinouye混养,所以是海水鱼类养殖的优良品种,为我国港养的主要经济鱼类之一(倪正泉1965;顾昌栋1958;陈大刚1974等)。关于斑(鱼祭)形态、生态学的研究,尤其是有关繁殖习     

高亲和力抗乙型肝炎病毒PreS1的人源单链抗体的获得:天然及免疫抗体库的对比研究

以健康人的外周血淋巴细胞为来源,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫.分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA,扩增抗体基因,构建大容量天然单链抗体(scFv)噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库.以PreS1肽进行3轮淘选后,抗原抗体反应结果显示,从免疫库中获得了亲和力10-7～10-8 M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体,高于天然库的结果(10-6～10-7 M).测序结果表明两株抗体均为人抗体.为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础.同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库.