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采用大鼠肾皮质新鲜冰冻连续切片,厚６μｍ。对相邻切片进行不同时间、不同ｐＨ值和不同底物浓度的Ｇｏｍｏｒｉ钙－钴法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。反应后的标本先用ＯｌｙｍｐｕｓＢＨ－２型显微镜Ｃ－３５ＡＤ－２型照相设备中曝光控制器,控制相同的入射光强度,对上述各不同组织化学反应条件的肾皮质,每一切片随机测定１０个视野曝光时间作为灰度参数。用图像分析仪测定同一切片的ＡＫＰ反应产物的平均灰度值和用曝光控制器显示的灰度参数进行相关、回归分析,结果如下：①随着反应时间的延长,灰度值相应增加,５分钟内,反应速度基本呈线性关系,３０分钟时,在光镜下发现反应产物有扩散现象;②在ｐＨ８时反应产物很弱,ｐＨ９和ｐＨ９．４时反应产物的灰度值最大;③随着底物浓度的增高,灰度值相应增加,而底物浓度０．５％～２％比３％～３０％时灰度值显著低;④灰度参数和图像分析的平均灰度呈明显的正相关,并计算出回归方程可以从灰度参数推算出图像分析的平均灰度值。根据实验结果绘制出不同时间反应曲线,不同ｐｈ值反应曲线,不同底物浓度反应曲线和直线相关曲线。可得出最佳反应时间、最适ｐＨ值和米氏常数 相似文献
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