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为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X fect转染试剂盒将重组质粒pEGFPC2-ICP27转染至Vero细胞中,并用RT-PCR及W estern b lot-ting检测其表达情况。结果显示,ICP27基因在Vero细胞中得到正确表达。真核表达质粒pEGFPC2-ICP27的构建成功,为进一步研究ICP27对宿主细胞的影响奠定了基础。 相似文献
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目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)对再生障碍性贫血(AA)患者外周血Fox P3m RNA表达量的影响,并初步探讨MSC发挥作用的机制。方法分离AA患者外周血T淋巴细胞,与体外培养扩增的健康供者MSC按3:1比例行共培养,共培养方式分为直接接触法及Transwell法,共培养72 h后收集T淋巴细胞,提取细胞总RNA,逆转录成c DNA,实时定量PCR检测共培养前后Fox P3m RNA的相对表达量。结果 T淋巴细胞与MSC共培养72 h后Fox P3m RNA相对表达量较前升高,直接接触组为9.13,Transwell组为5.18。结论 MSC可通过与T细胞直接接触或旁分泌机制上调AA患者外周血T细胞的Fox P3m RNA表达。 相似文献
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目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。 相似文献
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目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)的表达特点及其对细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF3真核表达载体pEGFP-C2/LAT-ORF3的可用性,并将其转染入vero细胞,通过荧光和RT-PCR检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:融合蛋白在细胞核中大量集中,且影响了绿色荧光蛋白在细胞中的分布;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF3可抵消空质粒对细胞的损伤作用;其作用靶点可能主要存在于细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF3在潜伏复发中的功能提供了实验基础。 相似文献
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目的：建立常见凋亡诱导剂顺铂（Cisplatin）诱导非洲绿猴肾细胞（Vero）凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法：分别以不同浓度的顺铂处理Veto细胞48h,用噻唑蓝（MTT）比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果：以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4,5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为（79．02±6．10）％、（68．84±4．42）％、（56．66±4．07）％、（46．83±3．76）％、（29．04±5．93）％（P〈0．01）;经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1．66％±0．19％、16．65％±1．26％、24．82％±1．03％、36．22％±1．04％、48．49％±1．24％、43．34％±1．17％（P〈0．01）。结论：本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。 相似文献
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