人胚大脑神经细胞在无血清培养液中的生长特性

本文介绍无血清培养的人胚大脑细胞在体外存活10—14天,最长可达21天;含血清培养48小时后再置于无血清液中者,存活2—4周左右。神经细胞在分化成熟时所具有的形态学特性与体内相似。神经特异性烯醇酶(NSE)免疫组织化学法,证实培养3天的神经细胞开始成熟,成熟率逐日增加,最高达86％以上。10％血清组,培养日龄较长,可达月余,形态特征与无血清组相似,但非神经细胞数较高。[~3H]-GABA特异性摄取功能随培养日龄增多而增高。无血清培养法能产生较多的神经细胞,可作激素、微量元素、生长因子等对神经细胞分化发育影响的研究,是一种较好的单因子分析系统。     

原代人胎成骨细胞体外培养方法的建立

我们分离、纯化人胎成骨细胞群,并在体外培养达15天。骨细胞群由5—6月龄的人胎长骨获得。使用形态学及生化指标测定,证实具有成骨细胞的典型特征:(1)形态学与外国学者报道的相一致;(2)碱性磷酸酶染色强阳性;(3)碱性磷酸酶含量较纤维母细胞酶含量高数倍至数十倍;(4)与纤维母细胞相比,成骨细胞有更高的钙摄入率;(5)在体外培养条件下可以发生钙化。纤维母细胞不具上述特点。使用成骨细胞做为生物学模型,可为体外条件下研究人体骨细胞的生理、病理及临床研究提供良好的实验手段。     

人神经干细胞的体外生物学特性

本实验利用有丝分裂因子,体外诱导生成人神 经干细胞(NSCs),观察其生长特性并进行鉴定。取胎龄10-22周的大脑半球,分散细胞后种于添加表皮生长因子(EGF,20ng/ml)和/或碱性成纤维生长因子(bFGF,20ng/ml)的培养基中。利用免疫组织化学方法鉴定分化后的细胞类型。同时,进行细胞克隆分析、传代培养及端粒酶活性检测。结果显示:NSCs呈悬浮生长的干细胞球,其特异性抗原nestin阳性。NSCs具有增殖能力,可连续传代而不丢失其增殖和多分化潜能的干细胞特性。撤除EGF和bFGF的作用,细胞停止分裂,并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。克隆分析显示NSCs生长呈密度依赖性。人NSCs表达较低的端粒酶水平,并随培养时间延长而下调。研究表明,利用有丝分裂因子,可在体外成功诱导生成人NSCs,其生长,分化受内外源因素的调节,相关的机制还有待阐明。