Anisomycin诱导小鼠艾氏腹水癌细胞凋亡

目的：探讨Anisomycin诱导EAC细胞凋亡的机制。方法：利用MTT法观察Anisomycin对EAC细胞增殖的影响;应用An．nexinV—FITC和PI双染色检测Anisomycin作用下EAC细胞凋亡的变化;琼脂糖凝胶电泳检测Anisomycin作用下EAC细胞的DNA断裂片断;采用RT—PCR检测Anisomycin作用下Caspase-3mRNA的转录水平;WesternBlot分析Anisomycin处理的EAC细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果：Anisomycin对EAC细胞增殖的抑制率随浓度的升高而增高,EAC细胞的凋亡水平也上升,随着Anisomycin浓度升高EAC细胞DNA断裂的寡核苷酸片段亦越趋明显,Caspase-3的mRNA和蛋白水平也上调,并明显高于阿霉素组。结论：结果表明,Anisomycin能够抑制EAC细胞的增殖,在体外可能通过激活Caspase-3凋亡信号而诱导EAC细胞的凋亡。     

Anisomycin诱导小鼠艾氏腹水癌细胞凋亡

目的:探讨Anisomycin诱导EAC细胞凋亡的机制。方法:利用MTT法观察Anisomycin对EAC细胞增殖的影响;应用AnnexinV-FITC和PI双染色检测Anisomycin作用下EAC细胞凋亡的变化;琼脂糖凝胶电泳检测Anisomycin作用下EAC细胞的DNA断裂片断;采用RT-PCR检测Anisomycin作用下Caspase-3 mRNA的转录水平;Western Blot分析Anisomycin处理的EAC细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:Anisomycin对EAC细胞增殖的抑制率随浓度的升高而增高,EAC细胞的凋亡水平也上升,随着Anisomycin浓度升高EAC细胞DNA断裂的寡核苷酸片段亦越趋明显,Caspase-3的mRNA和蛋白水平也上调,并明显高于阿霉素组结论:结果表明,Anisomycin能够抑制EAC细胞的增殖,在体外可能通过激活Caspase-3凋亡信号而诱导EAC细胞的凋亡。     

鞘蕊苏贝壳杉烯酸氧化酶基因的克隆及表达载体的构建

为提高鞘蕊苏有效成分的含量,开展Coleus Ent-kaurenoic acid oxidase(KAO)基因的克隆以及表达载体构建方面的研究。提取鞘蕊苏叶片的总RNA,利用套式PCR技术克隆获得KAO基因全长,将该基因连接到克隆载体p MD-18T,经测序鉴定正确后,再将该基因连接到p ET-28a表达载体中。结果显示,成功克隆出的鞘蕊苏KAO基因大小为1 500 bp,对克隆基因进行测序及酶切鉴定,均得到正确大小的DNA片段,说明表达载体构建成功。本研究成功克隆得到鞘蕊苏贝壳杉烯酸氧化酶基因并构建其表达载体,为提高鞘蕊苏有效成分含量提供了基础。     

毛喉鞘蕊花提取物对大鼠哮喘模型炎症介质的影响及机制研究

为探讨毛喉鞘蕊花提取物(Coleus Forskohlii extract,CFE)对哮喘的治疗作用及机制,采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)结合佐剂氢氧化铝建立大鼠哮喘模型,SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为5组,即空白组、模型组、地塞米松组、CFE高剂量组(12.8g/kg)和CFE低剂量组(6.4g/kg),分别用生理盐水、地塞米松及CFE每天灌胃1次,连续14天,灌胃容积为1mL/100g。通过HE染色观察肺组织病理学形态学变化;ELISA法测定大鼠血清(serum)及肺泡灌洗液(BALF)中IFN-γ、IL-4和IL-17A含量变化;Western blot检测MAPK通路相关蛋白的表达变化。HE结果显示,与模型组相比,CFE高、低剂量组能显著减轻OVA刺激后大鼠肺组织病理性损伤,气道轮廓清晰,上皮细胞脱落明显减少;ELISA结果显示,与模型组相比,CFE高、低剂量组大鼠血清及BALF中IL-4、IL-17A的含量明显下降,IFN-γ的含量明显上升(P<0.05或P<0.01);WB结果显示,CFE高剂量组可显著降低大鼠肺组织p-ERK、p-JNK及p-p38蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。综上,毛喉鞘蕊花提取物可有效缓解OVA诱导的大鼠哮喘气道炎症反应,其机制与调节MAPK信号传导通路有关。