猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac粘附抗原的核苷酸序列分析

 本文对国内流行的猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac抗原的结构基因的核苷酸序列进行了测定。该基因由849对核苷酸组成,编码了283个氨基酸的蛋白亚单位及21个氨基酸的信号肽。与国外报道的K88ac序列的不同是我们发现一个碱基的点突变,导致在抗原决定簇内一个氨基酸的改变。从核苷酸序列推导出的氨基酸序列与另两种亚型进行了比较。     

以双脱氧链终止法测定dG、dC接尾的cDNA克隆序列

组建重组克隆常采用均聚加尾法,即以dG尾加在经Psi I酶切的质粒载体上,dC尾加在待克隆的双链。DNA分子上,这样产生的带有均聚尾的重组克隆给双脱氧链终止法［2, 3]侧定序列带来很大的困难,即接尾后的序列往 柱不能阅读。我们对序列测定的某些步骤进行了修改,使接尾后的序列清晰可读。