猪链球菌2型FBPS的纤连蛋白结合部位的初步确定

根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a( ),构建分别表达全长7~82、7~165和87~320氨基酸FBPS的重组表达质粒pFBPS、pFBPS(7~82)、pFBPS(7~165)和pFBPS(87~320);将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE)株,经IPTG诱导,表达rFBPS(7~82)、rFBPS(7~165)、rFBPS(87~320)和rFBPS(全长),分子量分别为29、34、42及83kD的融合蛋白。配基亲和Western blot试验表明,表达的融合蛋白除rFBPS(7~82)外,均可与人纤连蛋白(Fn)结合,由此可以推断SS2的纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)N端87~165氨基酸区域为具有结合活性的线性部位。     

用生物信息学方法预测猪链球菌2型05ZYH33株的脂蛋白

[目的]鉴别已公布基因组序列的SS2 05ZYH33株的脂蛋白(Lpp).[方法]首先从Genbank获取由 SS2 05ZYH33基因组推测的蛋白质氨基酸序列,然后利用Lpp预测软件PrositeScan和DOLOP预测05ZYH33株的Lpp,采用SignalP 3.0 HMM、PrediSi、Phobius、LipoP-HMM和TMHMMversion2.0分析预测的Lpp的信号肽,然后经"多数票决法"确定Lpp;最后利用InterProScan和BlastP服务器对鉴定的Lpp进行功能分析.[结果]鉴定出34种Lpp,占SS2致病株05ZYH33蛋白质组的1.555%.结构与功能分析结果表明,最大的一类Lpp是ABC运输蛋白的底物结合蛋白,共有16种,其中YP_001197586、YP_001197918、YP_001198449、YP_001199435、YP_001197482、YP_001199452和YP_001198914等7种基因可与其他成分组成完整的ABC运输蛋白操纵子,这些Lpp在SS2获取糖、氨基酸和金属离子等营养物质方面具有重要作用.YP_001197698与无乳链球菌的黏附素Lmb和化脓链球菌的黏附素Lbp及YP_001198710与肺炎链球菌的SlrA高度同源,推测它们与黏附功能有关,为SS2新的毒力因子;其他Lpp包括酶、参与蛋白质折叠过程的Lpp及功能未知的Lpp.[结论]这些资料提示Lpp在SS2的生理和致病性方面具有重要作用.     

猪链球菌2型的纤连蛋白/血纤维蛋白原结合蛋白基因的序列分析

目的 为确定猪链球菌2型(SS2)江苏分离株9801是否具有纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因(fbps)。方法 根据已发表的SS2 fbps序列,设计并合成1对引物,以SS2江苏分离株的基因组为模板,采用聚合酶链反应(PER)方法扩增fbps,克隆于pMD-T18载体。测定阳性质粒插入序列。利用DNAstar软件,比较所测序列与不同来源SS2的fbps和FBPS与链球菌属其他种同源蛋白的同源性。结果 扩增的fbps为1 938 bp,江苏分离株与猪源致病性SS2荷兰分离株的fbps序列有5个碱基不同,与ATCCA3765株有3个碱基不同,同源性均达99．99％以上。推导的氨基酸序列比较,分别有4个和2个氨基酸不同,同源性均为99％以上。纤连蛋白结合蛋白(FBPS)无前导序列,无锚定序列,与链球菌属其他种的同源Fn结合蛋白的同源性为68．8％～76．0％。结论 FBPS是一种无锚的黏附素。