单克隆抗体对肾综合征出血热病毒50k蛋白的分析

用18株抗肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,以下简称HFRS)病毒McAb,以Western-blot技术分析了纯化的该病毒50k蛋白。结果有7株McAb可与该蛋白反应。这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)亦各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50k蛋白的特性及结构均较复杂,尚须进一步研究。     

从构建的噬菌体抗体库中筛选抗甲肝人单抗

用固相化甲肝抗原,对所构建的噬菌体抗体库进行了3轮淘筛。第3轮淘筛后洗脱下来的噬菌体,较第l轮增加了近100倍。含有抗体重链基因和轻链基因的重组克隆．也由淘筛前的25％增至100％。说明甲肝抗原对抗体库的淘筛,富集了表面呈现甲肝人单抗的噬菌体。经夹心ELISA法筛选到抗甲肝病毒噬菌体抗体,并以竞争抑制实验进一步证实了这些抗体的特异性。     

肾综合征出血热病毒50K结构蛋白的纯化和鉴定

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗病毒抗原。将此粗制抗原通过抗HFRS病毒MeAb与Separose4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3MKCNS洗脱,获得了SDS-PAGE均一纯的特异性病毒结构蛋白,分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。初步认为该蛋白可能是HFRS病毒的一种囊脱蛋白。     

肾综合征出血热病毒血凝素的研究 Ⅱ.血凝和血凝抑制试验影响因素的探讨

本文探讨了肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝和血凝抑制(简称血抑)试验的主要影响因素,观察到HFRSV血凝素的制备要求较高,4℃保存的效果较好,血凝素对热似有一定的稳定性,血凝作用的条件较为严格,最佳pH在5.7—6.1,鹅血球较为敏感,氯仿法去除血清中非特异性抑制物有效而简便。通过试验条件的模索和方法的改进,使之适用于基层。     

单克隆抗体在酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒抗原中的实用性

本文采用ELISA双夹心法,通过对70份临床送检标本HSV抗原的检测,评价了单克隆抗体(McAb)在快速检测HSV抗原中的实用性。McAb ELISA法的敏感性为20～30TCID50/0.1ml,临床送检标本病毒抗原的检出与病毒分离结果的一致率为85％。两种McAb混合使用,可以提高方法的敏感性。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测流行性出血热病毒抗原

建立了检测流行性出血热(EHF)病毒抗原的双单克隆抗体(McAb)ELISA同接夹心法,用本法和间接荧光抗体技术(IFAT)相比较,IFAT检出感染细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而ELISA检测感染上清中病毒抗原的高峰在第14天,两方法检测179份人工感染EHF病毒的乳鼠脑和肺组织标本,阳性检出率分别为72.1％和68.2％,实验结果表明,本法特异,敏感,简便,不仅可用于EHF病原学研究,也适用于流行病学调查检测大量鼠肺标本。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PeAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合MeAb或其F(ab′)2,仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的保护作用。羊脑内注入JEV48小时后,出现发热不安等症状,这时由腹腔和椎管两种途径同时给予混合McAb,保护率达100％。存活实验动物脑组织内未分离出病毒;而死亡功物病毒分离阳性,脑组织经双PAP及HE染色证实JEV抗原阳性并伴有脑炎的病理改变。中和活性是JEV-McAb的主要保护方式,中和放价高的MeAb保护率也高。     

乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究

本研究根据已知的乙脑病毒(JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT-PCR 技术,一次扩增出了JEV的全长cDNA,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游.阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功.其次,合成一条含有 RNA聚合酶启动子序列的5′引物,利用长模板RT-PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录.转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变.收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法.本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT-PCR快速制备JEV感染性RNA的方法,将为JEV 分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础.     

单克隆抗体治疗日本脑炎病毒感染恒河猴的实验研究

感染日本脑炎病毒(JEV)的恒河猴,出现脑炎的一系列症状与体征,终因呼吸及循环衰竭而死亡。JEV感染猴体温升到超过39℃以上后的第2天,注射单克隆抗体(McAb)制剂进行实验性治疗。结果显示,McAb经肌肉、静脉、硬脑膜下加肌肉等不同途径注射后,均有良好的疗效,对恒河猴的保护率达100％,其中以硬膜下加肌肉途径注射McAb的效果最佳。多次注射McAb,未发现任何不良反应与毒副作用。本研究表明,将鼠源性McAb用于灵长类安全可靠,若过渡到临床使用,是可行的。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ.单克隆抗体介导细胞毒效应的研究

建立了单克隆抗体(McAb)介导细胞毒作用(ADCC)~(51)Cr释放试验的测定力法。确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同:McAb 1A12、2A8和1G8无ADCC活性;而1D10和2C5两株McAb作1:10稀释时,~(51)Cr释放率分别为27.09％和25.07％,稀释至1:100或1:1000时仍有ADCC活性。结果提示,不同的McAb抗原决定族诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上有差异,并为McAh治疗临床单纯疱疹病毒感染的可能性提供了实验资料。